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内皮抑素和平阳霉素对血管内皮细胞的作用

段红钰

  目的:比较重组人血管内皮抑制素、平阳霉素单独使用及联合应用对人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞的作用效果,探讨相关作用机制,以揭示内皮抑素应用于增生期血管瘤治疗的可行性。 方法:传代培养HUVEC细胞,取3-5代生长良好的细胞,将不同药物浓度内皮抑素、平阳霉素分别作用于HUVEC细胞,以四唑盐比色法(MTT法)比较两药作用24h、48h后对HUVEC细胞的细胞抑制率,苏木精-伊红(HE)染色光镜下观察药物作用前后细胞形态变化,用免疫组化法检测药物作用前后HUVEC细胞内血管内皮生长因子(VEGF)阳性表达的差异,流式细胞仪分析药物作用后HUVEC细胞的细胞凋亡情况。 结果:内皮抑素、平阳霉素分别作用HUVEC细胞后的吸光度值(OD值)均随药物浓度增大而减小,两药对HUVEC细胞的抑制作用表现出一定的浓度依赖性和时间依赖性。VEGF免疫组化染色显示两种药物分别作用后HUVEC细胞的细胞胞浆灰度值均增大。光镜下可见:内皮抑素作用后HUVEC细胞形态明显改变,盖玻片上可看到大量凋亡细胞,并随药物浓度增大而增多,平阳霉素作用后大量细胞悬浮,贴壁细胞数量明显减少,药物浓度越大而贴壁细胞越少。流式细胞仪测得两种药物单独使用均会引起HUVEC细胞凋亡,且均表现为浓度越大凋亡细胞数越多;两种药物联合使用表现出对HUVEC细胞的协同抑制效应。 结论:内皮抑素、平阳霉素对HUVEC细胞均有明显抑制作用,均能引起细胞凋亡,均阻止VEGF进入HUVEC细胞内从而抑制细胞的增殖,说明两药对血管内皮细胞的抑制作用的相关机制存在某种共性;较高浓度的内皮抑素仍以细胞凋亡为主,而平阳霉素浓度大于一定范围(>20μg/ml)细胞抑制逐渐以坏死占主导;平阳霉素对血管内皮细胞贴壁的影响较内皮抑素明显,揭示两种药物对血管内皮细胞的抑制作用存在差异;内皮抑素与平阳霉素的联合使用对内皮细胞的抑制有协同作用,为两种药物联合使用治疗增殖期血管瘤提供基础理论依据。……   
[关键词]:重组人血管内皮抑制素;平阳霉素;血管内皮生长因子;凋亡;血管内皮细胞;增生期血管瘤
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广西医科大学2011年