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聚磷菌的筛选及原生质体融合构建耐热高效PAOs

彭立强

  本论文从采自西安市北石桥污水净化中心和山东威海市污水处理厂的活性污泥中分离、纯化得到15株具有不同菌落形态的纯菌株,通过蓝白斑实验、PHB染色和多聚磷酸盐染色实验以及聚磷能力测定实验等方法筛选出一株高效的PAOs菌株,并将其命名为XB7。该菌株在YG培养基平板上呈白色,菌落形态不规则、表面粗糙、不透明,边缘较平整,有臭味。显微镜下观察该菌呈杆状,革兰氏阴性。生理生化反应鉴定为甲基红试验、V.P.试验、柠檬酸盐试验、H2S试验、淀粉水解试验呈阴性,氧化酶反应、硝酸盐还原反应、明胶液化实验呈阳性,且具运动性。参照《Bergey s Manual of Determinative Bacteriology》和《常见细菌系统鉴定手册》,初步确定菌株XB7为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。 对菌株XB7的生长特性研究表明,其最适生长pH为7.5,此时菌体浓度的OD值为0.93、聚磷率为92.4%。当pH小于6.0或大于8.5时,菌株XB7的生长受到抑制,聚磷能力偏低。当pH为5.5时,其聚磷率只有36%。菌株XB7的最适生长温度为25℃,此时菌体浓度OD600值为0.915,对应的聚磷率为96%。另外,实验结果还说明,XB7对高温较敏感,随着温度的升高,其菌体浓度明显下降,当温度升高至45℃时,菌体浓度OD值不足0.2,对应的聚磷率降至21%。 He-Ne激光-PEG复合诱导原生质体融合的最佳酶解条件为:XB7用浓度为lmg/ml的溶菌酶在28℃下处理1.5h,热带假丝酵母用5mg/ml的蜗牛酶在32℃处理1h。最佳激光照射时间为5min,此时双亲原生质体融合率达到最大值,为11.64×10-6。随着激光照射时间的延长,融合率下降显著,照射10min后的融合率仅为2.04×10-6。在40℃下,融合菌株JP3经15次传代培养后,聚磷率仍达85.87%,表明该融合菌株既耐热又能聚磷,且聚磷能力稳定,据此选定JP3为目标融合子。进一步实验结果表明,融合菌株JP3具备很强的耐热能力,最适生长温度为42℃,其最适生长pH为7.5,且只要pH在6.5-8.0范围内,JP3都能正常生长,OD600均在0.7以上。在最适生长条件下,融合菌株JP3的菌体OD600值最大达到0.97,聚磷率最大值为96.8%。……   
[关键词]:聚磷菌;生物除磷;菌种筛选;生长特性;He-Ne激光;耐热性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北大学2011年