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褐藻酸寡糖的分离分析及其抗氧化活性的研究

李潇

  褐藻酸是一种天然酸性多糖,在食品、医药等领域有着广泛的应用。褐藻酸寡糖溶解性好,易于吸收,有多种重要的生理活性成为近年来研究的热点。本文以褐藻酸多糖为原料,首先通过不完全酸水解和pH分级分离的方法获得聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸两个独立的片段,并对其分别进行酶解获得均一的甘露糖醛酸寡糖混合物和均一的古罗糖醛酸寡糖混合物。采用强阴离子交换柱结合梯度洗脱装置对寡糖混合物进行分离,制备了相应的寡糖单体。对得到的不同聚合度的单体进行了ESI-MS分析,并对活性进行了初步探究,主要结果如下: 1.褐藻酸多糖的部分理化性质 气相色谱法分析得出褐藻酸的M/G值为3.9:1;咔唑-硫酸法测得糖醛酸含量为83.3%;苯酚-硫酸法测得其总糖含量为83%;高效凝胶渗透色谱法测得其分子量为9.4×104Da; 2.褐藻酸的降解 褐藻酸酸水解后经pH分级分离,获得聚甘露糖醛酸和聚古罗糖醛酸。分别对两个大片段进行酶法降解获得相应的寡糖混合物,并进行TLC和ESI-MS分析。结果显示,以最优条件为0.05 mg/mL的酶浓度降解聚甘露糖醛酸2h可获得Dp2~11的寡糖混合物;以最优条件为0.03 mg/mL的酶浓度降解聚古罗糖醛酸1.5h可获得Dp2~11的古罗糖醛酸寡糖混合物。 3.两种活性寡糖的分离及ESI-MS分析 采用强阴离子交换柱色谱结合连续的梯度洗脱对寡糖混合物进行分离,分别制备了Dp2~4的甘露糖醛酸单体和Dp2~5的古罗糖醛酸单体,并以ESI-MS对其进行了聚合度归属。对PMP标记的甘露糖醛酸四糖和古罗糖醛酸四糖进行二级质谱分析,结果显示m/z 797.17的离子碎片是相应质谱条件下甘露糖醛酸四糖区别于古罗糖醛酸四糖的主要特征碎片。 4.甘露糖醛酸和古罗糖醛酸的活性分析 (1)采用邻苯三酚自氧化体系研究了甘露糖醛酸和古罗糖醛酸寡糖的体外清除02·-的能力,结果显示其对氧自由基的清除均有明显的效果,浓度越大清除率越高,且古罗糖醛酸寡糖对02·-的清除能力稍强于甘露糖醛酸。其中在糖浓度为1.0mg/mL时寡聚古罗糖醛酸清除率高达75%。 (2)采用Fenton反应体系测定其清除·OH的能力,结果显示随着浓度的增大甘露糖醛酸和古罗糖醛酸对·OH作用增强,但古罗糖醛酸寡糖的清除力弱于甘露糖醛酸寡糖。……   
[关键词]:褐藻酸;古罗糖醛酸;甘露糖醛酸;分离;ESI-MS;抗氧化活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北大学2011年
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