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石耳科真菌的分离培养及其生物活性的研究

邱振鲁

  石耳科(umbilicariaceae)是一类生境较为特殊的地衣,多生活于高海拔或高纬度地区岩石表面,该科的一些种类具有抗肿瘤、抗微生物、抗艾滋病病毒和酶抑制剂活性。然而以往对于石耳科地衣活性的研究仅限于地衣体和地衣内生菌方面的研究,对于石耳科地衣共生菌的研究却未见相关报道。本文作者对Umbilicaria muehlenbergii地衣共生菌的活性进行了研究,以期待对于石耳科地衣共生菌资源的开发利用提供可靠的数据支持。 本文应用一种新的分离培养方法——刮皮层培养法分离得到了Umbilicaria muehlenbergii单细胞形态地衣共生菌,采用该方法,所获得共生菌的萌发率为71.5%,杂菌污染率7.14%,远远优于同种地衣体采用Yamamoto分离法得到的萌发率(60.71%)和杂菌污染率(21.43%)。 本文对分离获得的单细胞形态地衣共生菌的ITS序列与地衣体Umbilicaria muehlenbergii进行了比对,发现相似性达到99%,分离培养得到的单细胞形态真菌即为Umbilicaria muehlenbergii地衣体共生菌。 采用正交试验,对单细胞形态Umbilicaria muehlenbergii地衣共生菌的发酵条件进行了研究,结果表明在25℃下,采用MS培养基,额外添加碳源为甘露醇是共生菌生长的最佳条件。 Umbilicaria muehlenbergii是目前所发现的唯一一种两型性地衣型真菌。所谓两型性真菌是指在生活史的不同阶段,分别具有单细胞形态和菌丝形态两种形态的真菌。由于酵母形态真菌生长速度较快,较为容易获得真菌的发酵产物,这为地衣共生菌的活性物质研究和发酵生产提供了便利。 本文对Umbilicaria muehlenbergii地衣共生菌发酵产物的乙酸乙酯提取物、水提物、酵母细胞、固体发酵产物的抗菌活性进行了研究,实验结果表明:绝大多数样品对于供试菌株金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、以及螺杆菌的五个菌株没有表现出活性。 本文对Umbilicaria muehlenbergii地衣共生菌发酵产物的水提物进行了抗肿瘤活性的研究,肿瘤细胞采用人类胃腺癌细胞AGS。研究结果表明该共生菌产物对于此肿瘤细胞没有表现出抑制活性。 本文从清除自由基DPPH,抗亚油酸氧化和还原力三个角度对Umbilicaria muehlenbergii发酵产物的抗氧化活性进行了研究。结果表明:在浓度330ppm下,对自由基DPPH的清除率达到65.18%,抗亚油酸过氧化抑制率达到74.45%,还原力活性达到0.88,显示了该共生菌较强的抗氧化活性。 本文对Umbilicaria muehlenbergii地衣共生菌由单细胞形态向菌丝体形态进行转化的条件进行了初步研究,结果表明,采用变化温度培养,有菌丝形态被成功诱导出,饥饿条件也对单细胞向菌丝形态的转化起到一定作用。……   
[关键词]:Umbilicaria muehlenbergii;分离培养;生物活性;两型性真菌;转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东师范大学2011年