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不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽抑菌活性及其Tricine-SDS-PAGE分析

谢咸升

  本论文以饥饿处理后的黄粉虫(Tenebrio molitor)幼虫为试验材料,通过饲4株细菌、针刺后饲10株真菌、1株放线菌诱导免疫,经研磨、加热、冷冻离心法获得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法测定其对24种植物病原真菌和2种动物病原细菌抑菌活性,利用三等分法划分四种类型评价抑菌活性及抑菌谱;计算抑菌活性前3位处理的频次;用Tricine-SDS-PAGE法分离纯化、Gel-Pro analyzer软件分析不同菌源诱导免疫所产生的抗菌肽差异,测定主要活性成分的分子量。结果如下: 1、不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽抑菌活性上存在明显差异 不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽抑菌活性较好的有番茄灰霉病病菌、黄瓜灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌、辣椒根腐病病菌等,其中采用球孢白僵菌(家蚕)诱导后的提取物对番茄灰霉病病菌最大抑菌活性直径达到6.23mm,而采用浅灰链霉菌诱导后的提取物对小麦根腐病病菌最大抑菌活性直径达到0.94mm。对番茄灰霉病病菌、甘薯软腐病病菌的高活性、中活性区处理数之和最高(32个),各占总处理数(60)的53%,而对甘薯黑斑病病菌高活性、中活性区处理数之和最低(2个),占总处理数的3%;对甜瓜炭疽病病菌无活性处理数最高(44个),占总处理数73%,而对金黄色葡萄球菌无活性处理数最低(4个),占总处理数7%。 2、黄粉虫抗菌肽诱导处理间在抑菌谱方面存在明显差异 与对照组相比,经枯草芽孢杆菌、Bt、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌诱导第1、2、3天诱导处理在高活性、中活性、低活性区抑菌水平抑菌谱数目增加,无活性抑菌谱数目明显减少,其中枯草芽孢杆菌诱导抑菌活性最为明显;经虫生真菌及生防放线菌浅灰链霉菌诱导处理绝大部分抑菌谱数在高活性区明显增加,中活性区增加,无活性区明显减少,而经普通真菌干酵母诱导处理基本维持在对照水平上。值得注意的是抗菌谱种类不尽相同。 3、黄粉虫抗菌肽抑菌活性前3位诱导处理频次上存在明显差异 频次顺序依次为生防细菌、虫生真菌、杀虫放线菌及动物病原细菌等,其中枯草芽孢杆菌诱导处理出现频次最高,达到11.5,球孢白僵菌(家蚕)、Bt、CK(水)诱导处理出现频次最低,达到2.6,最高频次是最低频次的4.4倍左右。生防微生物可以更好地诱导昆虫抗菌肽的表达。 4、不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽种类有一定差异 不同菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽种类不完全相同,同一菌源诱导免疫的黄粉虫抗菌肽种类、数量随提取时间也存在一定差异。获得了4.2kD、5.2kD、6.6kD、6.9kD、11.0kD、12.6kD、13.2kD、14.7kD、17.8kD、18.7kD、23.6kD、24.4kD、25.1kD、25.3kD、25.8kD、26.0kD、27.6kD、28.5kD(已报道的在4.5kD左右)等一系列多肽条带(电泳纯)。例如对番茄灰霉病病菌效果好的球孢白僵菌(家蚕)诱导后第2天提取的黄粉虫抗菌肽表达了5.2kD、6.6kD、11.0kD、18.7kD等多肽。 5、选择适宜的诱导方式和提取时间对发掘抗菌肽资源非常重要 本研究发现:诱导物种类和提取时间对诱导抗菌肽的种类、数量和活性有较大影响;不同诱导方式和提取时间所获抗菌肽种类和数量上的不同,是其抑菌活性和抑菌谱差异大的主要原因;抗菌肽的诱导表达存在着复杂的调控机制;诱导型抗菌肽在抑菌活性中起主要作用。……   
[关键词]:黄粉虫;诱导免疫;抗菌肽;抑菌活性;抑菌谱;Tricine-SDS-PAGE
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2011年