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蚓激酶的提取纯化、酶学性质及抗血栓效果研究

周海

  本试验以赤子爱胜蚓为原料,探讨了蚓激酶的纯化工艺参数,并对蚓激酶的酶学性质和蚓激酶的溶栓效果进行了研究。试验分为两个部分: 试验一:蚓激酶的提取、纯化及酶学性质研究 以赤子爱胜蚓为原料,经过匀浆抽提、硫酸铵分段盐析、膜分离、Sephadex G-75,DEAE-Sepharose 6 Fast Flow和Phenyl Sepharose High Performance色谱分离、电泳等技术对蚓激酶进行分离纯化及鉴定,并研究pH、温度、金属离子与抑制剂对蚓激酶活性的影响以及蚓激酶的作用机理。结果表明:经分离纯化后的蚓激酶比活为5100 U/mg,SDS-PAGE电泳分析得两条带,相对分子质量为32000和33500;在中性和略偏碱性环境中稳定且活性高;温度适应范围广;不同种类及浓度的金属离子对蚓激酶活性的影响不尽相同;抑制剂及底物特异性研究发现,蚓激酶属于丝氨酸蛋白酶,同时含有二硫键。体外溶栓试验表明,蚓激酶具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用。 试验二:蚓激酶抗角叉菜胶诱导大鼠血栓形成及对凝血指标的影响 试验通过大鼠角叉菜胶血栓模型,对蚓激酶的溶栓效果进行了研究。结果显示,高剂量的蚓激酶能够降低角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓形成率,减小角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓平均长度,并对血栓长度的持续增长有缓解作用;与模型对照组相比,高、低剂量组均能使凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)延长,纤维蛋白原含量(Fib)下降,其中高剂量组PT显著延长(P<0.05),维蛋白原含量明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义;而且,高剂量的蚓激酶还能缓解注射角叉菜胶引起的体重负增长,说明蚓激酶能够提高机体的纤溶功能,具有预防和缓解血栓形成的作用。……   
[关键词]:蚓激酶;纯化;酶学性质;溶栓效果;角叉菜胶;凝血指标
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:武汉工业学院2010年