手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

玉米细菌性叶斑病病原菌鉴定与分子检测

司鲁俊

   玉米细菌性叶斑病是指由几类细菌引起的玉米多种叶部斑点病的总称,病原菌种类和病害症状均表现出多样性。近几年来,该病有逐年加重的趋势,感病品种既有普通玉米,也有甜糯玉米,据调查,在我国大部分地区均有发生。玉米细菌性叶斑病具有传播快、发病迅速、控制难度大等特征,已在局部地区开始影响玉米生产,但是国内外对其的研究却很少。 本论文通过对菌株的致病性测定和培养性状的观察,选择致病性较强、引起病害较广泛且严重的褪绿斑型症状的病原菌开展研究。通过常规的形态学观察和生理生化鉴定、全细胞脂肪酸测定和16S rDNA序列特征分析,将这类菌株鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。同时利用已发表的特异引物对Pantoea ananatis进行分子检测。利用细菌16S-23S rDNA ITS通用引物L1/L2对病原菌B. megaterium的ITS序列进行扩增,得到大小为125 bp的片段。将所获片段在NCBI中进行Blast同源序列检索后, 利用引物设计软件premier5.0设计出特异性引物BaF1/ BaR1。该引物只能从目标菌中扩增出1条大小为125 bp的产物,非B. megaterium的参试菌株均无扩增条带,表明该引物具有很高的特异性。利用该引物检测B. megaterium的菌悬液和基因组DNA的灵敏度分别达到了3×104 CFU/mL和6 pg/μL,从而建立了B. megaterium的分子快速检测体系,在实践中仅用特异性引物BaF1/ BaR1即可对B. megaterium进行检测。 从保存的玉米细菌性叶斑病分离物中,将与B. megaterium和P. ananatis菌落形态和培养性状相似的菌株挑选出来,其中用特异引物BaF1/ BaR1将分离自浙江、海南和云南的10株菌扩增出125 bp的特异性条带,鉴定为B. megaterium;而用特异引物PanITS2-1F/PanITS2-1R将分离自浙江、海南和北京的其他7株菌扩增出363 bp的特异性条带,鉴定为P. ananatis。……   
[关键词]:玉米;细菌性叶斑病;病原菌;巨大芽孢杆菌;菠萝泛菌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆农业大学2010年