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瘤内注射重组人血管内皮抑素对小鼠Lewis肺癌移植瘤抑瘤作用的研究

王丽芳

  目的 观察经皮穿刺瘤内局部注射重组人血管内皮抑素(恩度,Endostar)及联合顺铂对小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的抑瘤效果及毒副反应,为临床上采用瘤内注射重组人血管内皮抑素与化疗药物联用治疗肺癌提供实验依据。 方法 1.建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌(LLC)右上肢腋皮下移植瘤模型。 2.实验分组 接种后根据体重随机分为5组,每组10只。待移植瘤体积长至400mm3左右时,开始给予药物干预。生理盐水组(NS组),生理盐水每日腹腔注射0.2ml,共10天;顺铂组(DDP组),顺铂2mg/(kg·d)每日腹腔注射,共7天;瘤内注射恩度组[Endo(it)],恩度5mg/(kg·d)每日瘤内局部注射,共10天;顺铂联合腹腔注射恩度组[DDP+Endo(ip)],顺铂2mg/(kg·d)每日腹腔注射,共7天,同时联合恩度5 mg/(kg·d)每日腹腔注射,共10天;顺铂联合瘤内注射恩度组[DDP+Endo(it)],顺铂2mg/(kgd)每日腹腔注射,共7天,同时恩度5mg/(kg·d)每日瘤内局部注射,共10天。 3.小鼠一般状况观察 每日观察小鼠反应、觅食、饮水、活动状况等一般情况。 4.肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线 用游标卡尺测量肿瘤最大长径(L)和与之垂直的宽径(W),每3天测量1次,肿瘤体积V=LW2/2,绘制各组移植瘤生长曲线(0-11 d)。 5.测量肿瘤质量,计算抑瘤率。 6.病理组织技术,观察肿瘤组织结构及肺转移情况,免疫组化技术观察移植瘤组织微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)表达。 7.酶标记免疫吸附法(ELISA法)检测小鼠血浆VEGF浓度。 结果 1.接种后5天出现肉眼可见的肿瘤,模型建立成功。 2.对小鼠一般情况的影响 用药后NS组荷瘤鼠随着移植瘤结节的逐渐长大,进食、饮水、活动均较前减少;DDP组、DDP+Endo (ip)组.、DDP+Endo(it)组小鼠活动明显减少,饮食量明显下降,但体重无明显减轻。Endo (it)组小鼠进食、饮水较前无明显变化,活动正常,持续到实验结束。 3.对移植瘤体积、质量的影响 肿瘤体积(mm3):各试验组小鼠皮下移植瘤体积随实验进行逐渐增长,NS组体积增长迅速,而DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo (ip)组.、DDP+Endo(it)组肿瘤体积增长缓慢。实验结束时,NS组、DDP组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组小鼠移植瘤体积的平均值依次为2481.00±392.36 mm3、1124.98±278.25mm3、1796.79±256.51 mm3、734.97±279.77 mm3、708.35±189.77mm3。其中,NS组与DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义(P<0.05);DDP组与Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义;Endo(it)组与DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异也均有统计学意义(P<0.05),而两联合组之间差异没有统计学意义(P>0.05),但DDP+Endo(it)组的肿瘤体积小于DDP+Endo(ip)±组。 肿瘤质量(g):NS组3.86±0.40,DDP组1.49±0.30, Endo(it)组2.80±0.17,DDP+Endo(ip)组1.16±0.30, DDP+Endo(it)组1.00±0.23。抑瘤率(%):DDP组61.44、Endo(it)组27.64、DDP+Endo(it)组69.87、DDP+Endo(it)组74.24。其中,NS组与DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义(P<0.05);DDP组与Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义;Endo(it)组与DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组比较差异也均有统计学意义(P<0.05),而DDP+Endo(ip)组与DDP+Endo(it)组之间比较差异没有统计学意义(P>0.05),但DDP+Endo(it)组的瘤重减少最明显,抑瘤率高达74.24%。 4.对移植瘤微血管密度的影响 以CD34作为血管内皮细胞的标志物,血管内皮细胞的胞浆被染成棕黄色。NS组、DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组MVD计数平均值分别为13.8±1.9,11.8±2.4,4.4±1.7,4.2±13,1.8±0.8。与NS组比较,各药物干预组MVD值均减低;除DDP组外其余用恩度药物干预的三组与NS组比较差异均具有显著性(P<0.05);DDP组与Endo(it)组、DDP组.与DDP+Endo(ip)组、DDP组与DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义;两联合组间差异具有统计学意义,其中DDP+Endo(it)组明显低于DDP+Endo(ip)组。 5.对移植瘤血管内皮生长因子表达的影响 VEGF蛋白表达在肿瘤细胞的细胞质中,显为棕黄色的颗粒。NS组、DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组VEGF表达结果评分分别为6.4±0.9,6.2±0.8,4.4±0.5,4.6±0.5,3.4±1.1。与NS组比较,各药物干预组VEGF蛋白表达均减低:除DDP组外其余用恩度药物干预的三组与NS组比较差异均具有显著性(P<0.05);DDP组与Endo(it)组、DDP组与DDP+Endo(ip)组、DDP组与DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义;两联合组间差异具有统计学意义,其中DDP+Endo(it)组明显低于DDP+Endo(ip)组。 6.对小鼠血浆血管内皮生长因子的影响 NS组、DDP组、Endo(it)组、DDP+Endo(ip)组、DDP+Endo(it)组血浆VEGF水平如下:115.58±19.92(pg·ml-1)、58.97±14.27(pg·ml-1)、51.90±11.02(pg·ml-1)、31.10±7.56 (pg·ml-1)、12.63±3.94(pg·ml-1)。各药物干预组与NS组比较,差异均有显著统计学意义(P<0.01);DDP组与DDP+Endo(ip)组、DDP组与DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义(P<0.05),但DDP组与Endo(it)组比较无明显差异(P>0.05)。Endo(it)组与DDP+Endo(ip)组、Endo(it)组与DDP+Endo(it)组比较差异均有统计学意义(P<0.05);两联合用药组间差异也具有统计学意义,其中DDP+Endo(it)组血浆VEGF水平明显低于DDP+Endo(ip)组(P<0.05)。 结论 1.重组人血管内皮抑素瘤内局部注射能够抑制小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤的生长及转移,与全身用药相比能增加抗瘤效果且不增加不良反应。 2.重组人血管内皮抑素瘤内局部注射可能通过抑制肿瘤组织血管内皮生长因子表达,降低小鼠血清血管内皮生长因子水平,来抑制肿瘤血管内皮细胞增殖、迁移,进而减少肿瘤新生血管的形成,减少肿瘤转移。 3.重组人血管内皮抑素瘤内局部注射与DDP联合,可协同发挥抗肿瘤作用,与单药组相比不增加化疗药物不良反应。……   
[关键词]:重组人血管内皮抑制素(恩度;Endostar);Lweis肺癌;肿瘤血管生成;VEGF;MVD
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:泰山医学院2010年