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藏獒三种组织成纤维细胞系的构建及生物学研究

敏云馨

  为了使青藏高原特有的珍稀犬种——藏獒的遗传资源在细胞水平上永久保存下来,本研究以2只1月龄藏獒为研究对象,采用胰蛋白酶热消化法构建了藏獒肾和心肌组织的成纤维细胞系;采用组织块培养法构建了藏獒耳缘组织成纤维细胞系。根据ATCC建立细胞系的具体要求,对三种组织来源的成纤维细胞系的培养条件和生物学特性进行了研究。结果:建立了藏獒肾细胞系(TMK)、耳缘组织细胞系(TME)和心肌组织细胞系(TMH),培养细胞的形态均为典型的成纤维型细胞;按照生物工程实验室常规细胞冻存方法冻存的三种组织细胞,复苏后,细胞成活率均保持在90%以上,细胞生长良好,生长曲线均呈“S”型.每代生长均经历了潜伏期、指数生长期和停滞期,符合体外细胞生长规律;在含胎牛血清10%的DMEM中,经7次传代培养后细胞形态无显著差异;细菌、真菌、支原体及病毒外源因子污染检测结果均为阴性;染色体核型分析结果:藏獒体外培养的成纤维细胞正常染色体数为2n=78,包括38对常染色体,均为端着丝点染色体;1对性染色体,X为中着丝粒染色体,Y为端着丝粒染色体。计数100个中期细胞染色体数目,其中2n=78的占90%,以二倍体占主体,表明所建细胞系遗传性基本稳定;同工酶电泳显示,藏獒肾组织、心肌组织、耳缘组织成纤维细胞乳酸脱氢酶(LDH)谱带均有三条,分别是LDH1、LDH2、LDH3。脂质体介导的绿色荧光蛋白质粒转染藏獒三种组织成纤维细胞,转染24h后转染率分别为肾细胞50%、心肌51%,耳缘组织50%,表明所建细胞系能有效地转染表达外源基因。结论:构建的藏獒三种组织成纤维细胞系符合ATCC细胞系构建要求。……   
[关键词]:藏獒;成纤维细胞系;细胞生物学特性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北民族大学2010年
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