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养心汤含药血清对H_2O_2诱导内皮损伤模型差异基因及Smad4 mRNA表达的影响

李杨

   目的:通过观察中药复方养心汤含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞增殖、差异基因及Smad4 mRNA表达的影响,从分子生物学水平探讨其可能的作用机制,为临床应用提供客观依据。 方法: 1.将20只雄性wistar大鼠随机分为空白对照组和养心汤组,每组各10只。养心汤组给予灌服养心汤,每日给药2次,空白组给予灌服同体积的生理盐水,每日给药2次,均连续给药1周,于末次给药后采血。 2.实验一分为①空白血清组;②模型组;③养心汤含药血清2%组;④养心汤含药血清4%组;⑤养心汤含药血清6%组;⑥养心汤含药血清8%组。 3.过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤,复制内皮细胞氧化损伤模型。 4.采用倒置显微镜、MTT法观察养心汤含药血清对过氧化氢氧化损伤内皮细胞细胞增殖的影响。 5.采用Affymetrix人基因组U133 +2.0芯片观察养心汤含药血清对过氧化氢氧化损伤内皮细胞差异基因表达的影响。 6.采用实时定量PCR的方法观察养心汤含药血清对过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA表达的影响。 结果: 1.从倒置显微镜下观察到,养心汤含药血清2%、4%、6%、8%组能够减轻过氧化氢对内皮细胞的损伤,其中以养心汤含药血清6%、8%组的效果最佳。 2.养心汤含药血清2%、4%、6%、8%组可以增加内皮细胞增殖率,其中以6%、8%组的效果最佳,与模型组比较,差异有统计学意义(P﹤0.01)。养心汤含药血清6%、8%组组间比较,差异无统计学意义( P>0.05) 3.人脐静脉内皮细胞基因表达谱研究结果显示:模型组与空白组比较,差异表达基因132个,84个基因表达上调,48个基因表达下调;养心汤组与空白组比较差异表达基因1645个,其中1371个基因表达上调,274个基因表达下调;其中模型组与养心汤组比较,差异表达基因35条,模型组表达上调、经养心汤防治后表达下调的基因23条,模型组表达下调、经养心汤防治后表达上调的基因12条。经过MAS分析后,其分子功能生物进程与负调控细胞增殖、细胞生长有关的基因有Smad4;与负调控细胞迁移有关的基因有NF1;与血管生成有关的基因有NF1、SHB等。 4.养心汤含药血清6%组可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达。 结论: 1.养心汤含药血清可以降低过氧化氢对内皮细胞的损伤,增加内皮细胞的增殖率,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的机制之一。 2.养心汤含药血清可以调控过氧化氢氧化损伤内皮细胞的基因表达。这些基因与细胞增殖和生长、细胞周期、细胞迁移、血管生成等有关,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的机制之一。 3.养心汤含药血清可以下调过氧化氢氧化损伤内皮细胞Smad4 mRNA的表达,这可能是其防治冠心病不稳定型心绞痛的机制之一。……   
[关键词]:养心汤;基因芯片;不稳定型心绞痛;Smad4;内皮损伤
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:黑龙江中医药大学2010年