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脐带间充质干细胞治疗急性肾小管坏死的实验研究

党智杰

  目的: 研究人脐带间充质细胞移植对肾毒性急性肾小管坏死再生修复的作用及可能机制。 方法: 1.模型制备及分组:(1)健康家犬14只,随机分为二组。模型1组(静脉组):肌肉注射新鲜配置的0.2%HgCl2溶液(7mg/kg)建立急性肾小管坏死模型,采用经外周静脉注射法移植由体外分离培养并用DAPI标记的人脐带间充质干细胞。模型2组(介入组):造模方法同模型1组;(2)120只SD大鼠随机平均分为三组。移植组:造模成功后采用尾静脉静脉注射法移植体外分离培养并用DAPI标记的人脐带间充质干细胞;ATN组:造模成功后不做特殊处理;空白组:正常大鼠。将总量900mg/kg庆大霉素,首次300mg/kg、余600mg/kg分三次,即200mg/kg/次X3次,腹腔注射,3天成模。 2.细胞移植:(1)移植家犬采用右股动脉介入经左肾动脉直接注射的方法移植由体外分离培养并用DAPI标记的人脐带间充质干细胞。(2)SD大鼠采用尾静脉移植。 3.指标观察:(1)家犬细胞移植后24h处死动物留取肾脏,光镜下观察肾组织形态改变,荧光显微镜下观察人脐带间充质干细胞植入实验动物体内后的存活情况。(2)①分别于干细胞移植后1d.4d.1w.2w及4w处死大鼠,留取血、尿及肾组织标本。检测血肌酐、尿素氮;②肾小管病理观察:肾组织病理切片,HE染色,光镜下观察每组动物各时间点肾小管的病理变化;③标记细胞定位跟踪:荧光显微镜下以紫外光370nm激发波长下观察DAPI阳性细胞。④肾脏组织相关细胞因子的检测:免疫组化方法检测肾脏组织BMP-7、Bcl-2等细胞因子表达水平 结果: 1.人脐带间充质干细胞在模型1组及模型2组病损肾脏中均成活,且两组荧光强度无明显差异(P>0.05)。 2.总量为900mg/kg首次300mg/kg后分3次200mg/kg皮下注射,造模成功率高,死亡率少。 3.移植组大鼠毛发光泽,脱毛少,死亡率小 4.移植组和ATN组大鼠Scr、BUN等指标均在1w达到峰值,2w时基本恢复;但移植组与ATN组相比,1d、4d、1w相对高值时,ATN组Scr、BUN明显高于移植组。 5.普通光镜下观察肾小管上皮细胞空泡变性、肿胀、坏死,细胞脱落。 6.荧光显微镜观察移植组大鼠肾小管部位显示绿色荧光,而肾小球部位呈阴性。 7.免疫组化方法检测移植组肾脏组织BMP-7明显上调,Bcl-2在移植组肾脏组织局部表达明显增加。 结论: 1.人脐带间充质干细胞经外周静脉注射法移植与股动脉介入经肾动脉直接注射方法移植两者无明显差异。 2.人脐带间充质干细胞移植能够有效治疗急性肾小管坏死。 3.HUCMSCs移植可以上调Bcl-2,减少肾小管损伤后的细胞凋亡,并增加肾小管上皮细胞的增生,从而促进肾小管和肾功能的恢复; 4.HUCMSCs移植可上调BMP-7表达,促进干细胞向肾小管上皮细胞分化。……   
[关键词]:人脐带间充质干细胞;急性肾小管坏死;移植途径;细胞因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:黑龙江中医药大学2010年