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生物转化法制备薏苡仁抗高血压活性肽的研究

岳文明

  本论文采用生物转化方法制备薏苡仁抗高血压肽,初步确定了薏苡仁活性肽的体外抗高血压活性,为抗高血压药的进一步研究提供参考。同时比较了酶法与发酵法制备薏苡仁肽的体外抗高血压活性,结果证明发酵法得到的活性肽具有更强的活性。 本实验分别进行了酶解法和发酵制备薏苡仁肽两方面的研究。优化了薏苡仁蛋白质水提和酶解条件,结果表明,蛋白质水提最佳条件为pH=10,温度70℃,料水比1:15;碱性蛋白酶(Alcalase)对薏苡仁的酶解效果最好,酶解最佳条件为加酶量5%,时间2h,料水比1:25,此时的多肽含量远远高出水解时的含量。用树脂对酶解液进行纯化,大孔吸附树脂DA201-C对酶解液的吸附效果较好;当酶解产物pH为5.5,上样流速1BV/h时,吸附率最高;当用75%乙醇进行解吸时,解吸时间和浓缩时间短,解吸率高。使用高效液相色谱(HPLC)测定树脂纯化后产物的分子量,分子量在278.61至943.32之间的物质占纯化后产物的99.3%。用葡聚糖凝胶Sephadex G-15对纯化产物进行分离,以去离子水为缓冲液时可以得到三个峰,其中B峰具有最高的ACE抑制率,为80.1%。 优化了薏苡仁蛋白质发酵条件,结果表明,三种曲霉分别发酵中药薏苡仁,活性肽含量黑曲霉达到6.14mg/ml;米曲霉达到2.58mg/ml;红曲霉分别为2.93mg/ml,因此确定黑曲为最佳菌种进行混合发酵。最佳条件为发酵时间90h,薏苡仁料液浓度9%,PH=5,接种量11%。混合发酵对黄酒酵母、酒精酵母、啤酒酵母进行筛选,确定黄酒酵母为最佳菌种。用树脂对酶解液进行纯化。使用HPLC测定树脂纯化后产物的分子量在267.91至930.35之间的物质占纯化后产物的98.4%。用葡聚糖凝胶Sephadex G-15对纯化产物进行分离,以去离子水为缓冲液时可以得到五个峰,其中B峰具有最高的ACE抑制率,为83.2%,体外抗高血压活性与酶解薏苡仁活性肽相比有所提高,因此发酵法比酶解效果更好。……   
[关键词]:薏芯仁;酶法;发酵;HPLC;抗高血压
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:黑龙江中医药大学2010年
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