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地黄饮子联合BMSCs对脑缺血大鼠脑组织细胞凋亡及HSP70、VEGF表达的影响作用

程小丽

  目的:以缺血性脑损伤大鼠为研究对象,探讨地黄饮子联合骨髓间充质干细胞(Bone marrow stromal stem cells, BMSCs)移植对大鼠缺血性脑损伤的脑组织神经细胞的保护作用;通过观察脑缺血损伤后神经细胞凋亡及HSP70、VEGF基因表达的变化,揭示地黄饮子孵育BMSCs移植的联合应用对脑缺血损伤后神经细胞的保护作用及其可能的作用机制。 方法:体外全骨髓贴壁筛选法获取BMSCs,分离并纯化至第3代,采用流式细胞术对细胞表型进行鉴定;制备大鼠空白血清、地黄饮子含药血清并孵育第3代BMSCs72h。选用健康SPF级Wistar大鼠,用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),造膜成功后将大鼠随机分为模型组、空白血清孵育BMSCs移植组(BMSCs组)、维甲酸孵育BMSCs移植组(维甲酸组)和地黄饮子血清孵育BMSCs移植组(地黄饮子组),另设假手术对照组;造模成功24h后,治疗组大鼠经尾静脉输入相应血清孵育后的BMSCs (1×106个/ml),假手术、模型组大鼠经尾静脉注射等量的生理盐水,移植7d和14d后断头取脑,制作石蜡切片,光镜下观察脑组织病理改变,用免疫组织化学法检测脑组织中Bcl-2、Bax、HSP70和VEGF蛋白表达的变化。数据采用SPSS16.0软件进行分析。 结果:(1)通过组织切片观察假手术组未见明显病理损伤,模型组神经细胞有不同程度的损伤和结构破坏。与模型组比较,BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组脑组织病理损伤程度减轻。与单纯BMSCs组比较,联合治疗组作用更为显著。并且镜下显示BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组神经细胞变性、坏死数量明显减少,间质水肿较轻。 (2)模型组大鼠较假手术组Bcl-2表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组Bcl-2表达较模型组显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);与单纯BMSCs组比较,联合治疗组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。 (3)模型组大鼠较假手术组Bax表达显著增强,差异有统计学意义(P<0.05); BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组各组较模型组减弱显著,差异有统计学意义(P<0.05);与单纯BMSCs组比较,联合治疗组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 (4)模型组大鼠较假手术组HSP70阳性表达增强,差异有统计学意义(P<0.05); BMSCs组、维甲酸组和地黄饮子组HSP70表达较模型组显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);与单纯BMSCs组比较,联合治疗组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。 (5)与假手术组比较,模型组缺血性脑损伤时大脑皮层VEGF蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);地黄饮子组、维甲酸组、BMSCs组与假手术组、模型组比较,缺血性脑损伤时皮层VEGF的表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);并且地黄饮子联合BMSCs移植组的治疗效果明显好于单纯BMSCs移植组的疗效,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:Bcl-2和Bax在缺血性脑损伤过程中发挥重要作用,地黄饮子对缺血性脑损伤具有保护作用,其保护作用机制可能与提高Bcl-2表达、抑制Bax表达而减少细胞凋亡有关,而且地黄饮子可以促进脑组织HSP70和VEGF的表达可能是地黄饮子孵育BMSCs移植治疗脑梗塞的作用机理之一。……   
[关键词]:缺血性脑损伤;骨髓间充质干细胞;地黄饮子;Bcl-2;Bax;热休克蛋白;血管内皮生长因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:兰州大学2010年