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一株产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的分离及其发酵条件的初步研究

王吉祥

  蛇足石杉(Huperzia serrata (Thunb.) Trev.)是一种多年生小型珍稀药用蕨类植物,属石杉科石杉属(Huperzia)。石杉碱甲(Huperzine A,简称HupA)是首先从蛇足石杉中分离得到的一种生物碱,其对老年性痴呆、重症肌无力和记忆力减退等疾病有很好的疗效。迄今,HupA主要从蛇足石杉等石松植物中分离提取,但蛇足石杉等石松植物HupA含量低、生长缓慢,野生资源十分有限,且其人工栽培技术尚未突破,因此HupA生产存在严重的原料短缺问题,必需寻找可替代的生产方式,否则蛇足石杉等石松植物资源将面临生存的威胁。 植物内生真菌能产生大量新的天然产物,有些内生真菌还可以产生与宿主植物相同或相近的代谢产物,已成为天然产物潜在的重要资源。据此,本文对产石杉碱甲蛇足石杉内生真菌进行了分离和筛选,并对产石杉碱甲内生真菌发酵条件进行初步研究,为利用内生真菌发酵生产石杉碱甲奠定基础。 本研究从蛇足石杉根、茎、叶中共分离出内生真菌56株,其中乙酰胆碱酯酶抑制率达到70%以上的内生真菌有14株,占分离内生真菌总数的25%。菌株Slf14的抑制率最高,达到96.47%,因此对菌株Slf14菌种和产物鉴定及发酵条件进行了研究。通过形态学结合ITS和18SrDNA序列分析,菌株Slf14被归属为竹黄菌属(Shiraia),命名为Shiraia sp. Slf14。薄层层析、高效液相色谱、紫外扫描、质谱以及核磁共振等实验证明菌株Slf14可合成石杉碱甲。内生真菌Slf14发酵条件的研究表明,在PDA培养基中加入酵母膏5 g/L、KH_2PO_4 1.0g/L、MgSO_4 0.3g/L、KNO_3 0.5g/L、KCl 0.5g/L;培养温度28°C、接种量10%、初始pH值5.5、摇床转速140r/min,培养14d,在这样的条件下石杉碱甲产量达到0.66mg/L,最高达到0.75mg/L。……   
[关键词]:竹黄菌Slf14;石杉碱甲;乙酰胆碱酯酶抑制剂;蛇足石杉;内生真菌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:江西师范大学2010年