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虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)毒性作用的初步研究

庞敏

  虾夷扇贝毒素(Yessotoxins, YTXs)是近年来在海产品质量监测方面颇受关注的一种聚醚类赤潮藻类毒素,它能在贝类体内累积进而对人类健康造成威胁。目前针对YTXs的毒性作用在国际上展开了很多相关的研究,但是尚未得出较为明确的结论。其毒性作用过程尚未完全清楚。 近两年来,在我国贝类样品中检测到YTXs存在,但是国内关于这种毒素的研究尚未见报道。 本论文主要是通过体内、体外实验对YTX在个体水平、组织水平和细胞水平的毒性作用进行研究,并对其作用的可能机制进行分析,·主要结果如下: 1.通过组织学和免疫学方法对YTX的神经毒性作用进行研究,发现YTX可以使雌性ICR小鼠小脑浦肯野细胞发生明显的组织学变化。S-100抗体的特异性免疫染色发现,YTX处理组小脑浦肯野细胞的S-100表达量增多,而S-100又是一种钙结合蛋白,因此YTX的作用可能与钙离子浓度相关。 2.对三株产YTXs的甲藻——网状原角藻(Protoceratium reticulatum, CCMP2776)、多边舌甲藻(Lingulodinium polyedrum,CCMP1931)以及具刺膝沟藻(Gonyaulax spinifera, CCMP409)产物进行LC-MS/MS分析,发现几种甲藻均产YTX、homo-YTX、45-OH-YTX,但是产毒能力不强,各藻种YTX产量低于已有报道。而P. reticulatum所产毒素物质最多,且其中homo-YTX产量最高,达到2.88pg·cell-1。 3.将YTX与人类的三种细胞系——肝细胞HL7702、肝癌细胞Bel7402及Hela细胞进行孵育,通过光学显微镜观察、Hoechst33342/PI双染色、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,同时对细胞内Caspase 3酶活力进行分析,发现YTX及藻毒粗提液能使三种细胞发生凋亡。另外,利用流式细胞术对细胞内线粒体膜电位及Ca2+浓度进行研究,发现YTX及藻毒粗提液可以造成线粒体膜电位下降和细胞内Ca2+浓度升高。 4.利用激光扫描共聚焦显微技术发现YTX及藻毒粗提液的加入瞬间,肝细胞HL7702、肝癌细胞Bel7402及Hela细胞内Ca2+浓度出现明显升高的现象,而用EGTA螯合掉缓冲液的Ca2+或者加入L-型钙离子通道阻断剂硝苯吡啶,都能抑制YTX对细胞内Ca2+浓度的影响。说明YTX主要作用细胞表面的L-型钙离子通道进而可以造成细胞外Ca2+内流。……   
[关键词]:虾夷扇贝毒素;毒性作用;细胞凋亡;线粒体膜电位;钙离子
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国海洋大学2010年