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基于JAK-STAT、SOCS信号通路探讨心痛舒预处理对心肌保护作用机制研究

陈楚淘

  目的:构建血瘀型心肌缺血再灌注大鼠病证模型,并从电生理、病理形态学、免疫组化、分子生物学等角度探讨JAK-STAT信号转导通路在模型中表达;基于JAK-STAT信号通路探讨心痛舒对血瘀型心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤预保护作用的分子调节机制。 方法:本研究分为三部分,第一部分实验:32只SD健康大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、血瘀型组、缺血再灌注组(IRI组)、血瘀型+缺血再灌注组(血瘀型+IRI组)。HE染色观察心肌组织形态学、心脏血管病理变化,ELISA法检测JAK-STAT信号通路上游分子IL-6、IL-10含量的变化,Western Blot法检测JAK-STAT信号通路中与心肌密切相关的JAK1、JAK2、STAT1、STAT3蛋白表达,探讨血瘀型心肌缺血再灌注大鼠模型的研制。第二部分实验:48只SD健康大鼠随机分为6组,每组8只,即假手术组、血瘀型+假手术组、血瘀型+缺血再灌注(IRI) 30min组、血瘀型+IRI60min组、血瘀型+IRI30min+心痛舒组、血瘀型+IRI60min+心痛舒组,HE染色观察心肌组织形态学,ELISA法检测IL-6、IL-10含量,Western Blot法检测心肌组织JAK1、JAK2、STAT1、STAT3蛋白表达,RT-PCR法检测心肌组织SOCS1、SOCS3 mRNA的表达,基于JAK-STAT、SOCS负调控信号通路探讨心痛舒对血瘀型心肌缺血再灌注损伤大鼠保护机制研究。第三部分实验:6孔板培养原代乳鼠心肌细胞,随机分为四组,即对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、盐酸维拉帕米组(Verapamil组)、心痛舒组,每组6重复孔。采用罗丹明染色观察缺氧/复氧心肌细胞形态学变化,Western Blot法检测心肌细胞JAK1、JAK2、STAT1、STAT3蛋白表达,从体外细胞证实心痛舒对心肌缺血再灌注损伤具有预保护作用,作用机制可能与JAK-STAT信号通路有关。 结果: 1、与假手术组比较,血瘀型组大鼠心电图QRS波出现增高、增宽,J点向上抬高,心痛舒预处理能使J点下移;心肌HE染色观察可见心肌细胞水肿,肌纤维有断裂现象,少量心肌细胞核溶解、消失、可见少量中性粒细胞侵润,心痛舒预处理能减轻上述症状。 2、与假手术组比较,血瘀型组大鼠血液流变学指标以及血栓素B2(Thromboxane B-2,TXB2)显著升高,差异具有非常显著性意义(P<0.01),而6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、一氧化氮(NO)含量显著降低,差异具有非常显著性意义(P<0.01);与血瘀型组比较,血瘀型+IRI组血液流变学以及TXB2显著升高,差异具有非常显著性意义(P<0.01),而6-keto-PGF1α、NO含量显著降低,差异具有非常显著性意义(P<0.01)。 3、与假手术组比较,血瘀型IL-6、IL-10显著升高,差异具有非常显著性意义(P<0.01),与血瘀型组比较,血瘀型+IRI组IL-6、IL-10显著升高差异具有非常显著性意义(P<0.01)。 4、与假手术组比较,血瘀型组心肌组织JAK1、JAK2、STAT1、STAT3蛋白明显升高,差异有非常显著性意义(P<0.01);与血瘀型组比较,血瘀型+IRI组心肌组织JAK1、JAK2、STAT1、STAT3蛋白明显升高,差异有非常显著性意义(P<0.01)。 5、与血瘀型+IRI30/60min组比较,血瘀型+IRI30/60min+心痛舒组心肌组织JAK1、STATA蛋白表达明显下降,差异有非常显著性意义(P<0.01);JAK2、STAT3蛋白表达明显增高,差异有非常显著性意义(P<0.01)。 6、与对照组心肌细胞比较,缺氧/复氧组细胞形态极不规则,大量碎片;Verapamil组心肌细胞形状较规则,碎片较多;心痛舒组心肌细胞形状较规则,碎片明显较少。 7、与缺氧/复氧组比较,心痛舒细胞JAK1、STATA蛋白表达明显下降,差异有非常显著性意义(P<0.01);JAK2、STAT3蛋白表达明显增高,差异有非常显著性意义(P<0.01)。 结论: 1、血瘀型心肌缺血再灌注损伤大鼠模型构建成功,该病证结合模型更加切合中医病机,为中医药防治心肌缺血再灌注损伤研究提供了更加接近临床症候的实验对象。 2、心痛舒对血瘀型心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护机制与JAK-STAT、SOCS信号转导通路有关。 3、体外实验进一步验证心痛舒参与JAK-STAT信号转导通路,从而发挥心肌缺血再灌注损伤保护作用。……   
[关键词]:血瘀型心肌缺血再灌注模型;心痛舒;JAK-STAT信号通路;SOCS负调控系统;缺氧/复氧
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:湖南中医药大学2010年