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甲状腺素受体B1基因在乳腺癌组织中的表达调控研究

令亚琴

  乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤,其发病率呈持续和明显上升趋势。现已公认肿瘤是一种基因病,研究与肿瘤相关的关键基因,不仅可以更加清楚地了解其发生发展的机制,而且为最终攻克此病奠定坚实的理论基础。 甲状腺素受体(TRs)是配体依赖性的核转录因子。TRs有TRA和TRB两种亚型,TRB因选择性剪接或转录起始位置的不同而产生TRB1和TRB2两种同分异形体。国外多项研究表明TRB1基因在多种肿瘤中存在质和量的改变,但在乳腺癌中的相关研究却很少,国内还未见相关报道。本研究首先采用RT-PCR方法在40例乳腺癌组织及10例乳腺正常组织中检测了TRB1基因mRNA的表达。结果显示40例乳腺癌组织中TRB1基因mRNA表达低下34例,而相应10例正常乳腺组织全部表达。乳腺癌组织与正常乳腺组织相比TRB1基因mRNA的表达明显下调,差异有显著性。这一结果说明TRB1基因在乳腺癌的发生发展中起到了重要作用。 目前对TRB1的研究多局限在mRNA和蛋白表达的改变上,对它失活的机制尚未阐明。近年来作为表遗传学最常见事件的DNA异常甲基化已成为研究基因沉默的焦点。故此,我们运用重亚硫酸盐处理基因组DNA-巢式PCR扩增-直接测序的方法对TRB1基因启动子区域的甲基化状态进行了检测。结果显示乳腺癌组织中TRB1基因启动子发生甲基化的检出率是80.0%,而正常乳腺组织TRB1基因无甲基化出现,测序结果展现了这一片段的高频甲基化位点;我们还分析了TRB1启动子区甲基化状态与mRNA表达的相关性,统计分析显示它们之间呈负相关性,所以我们认为TRB1基因启动子区域的高甲基化可能是该基因失活的机制之一。 我们在第二部分实验中发现有些肿瘤组织其启动子区未发生甲基化,但其mRNA表达却低下。故此,我们认为TRB1基因失活可能还存在其他的机制,于是,本研究通过PCR-结合基因测序方法,对10例乳腺癌组织中TRB1基因进行突变检测,结果显示在扩增的7-10外显子片段中均有突变,尤其是exon8中有6例出现P247A,同时在第1028位点缺失A; 2例启动子区无甲基化但mRNA表达低下的病例在1057位点处缺失A,引起移码突变,我们认为TRB1基因突变可能也参与到该基因失活的机制中。 通过本研究发现TRB1基因的改变与乳腺癌的发生密切相关,筛查该基因对乳腺癌患者风险评估、早期诊断及基因治疗具有重要意义。……   
[关键词]:乳腺癌;甲状腺素受体;mRNA;甲基化;突变
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2009年