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产γ—谷氨酰基转肽酶菌株的选育

王小力

   茶氨酸是茶叶中的特征氨基酸,同时也是茶叶中的呈味物质之一。茶氨酸具有非常重要的作用。但是茶氨酸的常规提取方法工艺和操作程序复杂,而且操作过程难以控制,提取产量低等缺点。而微生物转化法的应用越来越广泛,其中以γ-谷氨酰转肽酶合成茶氨酸的方法更为简便有效,目前分泌γ-谷氨酰转肽酶的微生物主要有大肠杆菌,枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌等菌种。而绝大多数菌株分泌的酶为胞内酶,不利于酶的提取和纯化。资料表明,枯草芽孢杆菌分泌的γ-谷氨酰转肽酶绝大多数能透过细胞膜和细胞壁到发酵液中,这就大大简化了实验的操作。 本论文从实验室保藏的菌株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)出发,通过对其进行诱变的实验,选育出了高产γ-谷氨酰转肽酶的菌株,并且遗传稳定性良好。通过紫外诱变和微波诱变所获得的稳定高产γ-GGT菌株的酶活分别为3.56U/mL和3.52U/mL。 同时,本实验对所选育出来的高产γ-GTP菌株进行了发酵培养基的优化,在35℃培养时得到其最适发酵培养基组成是碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母膏,最适初始pH值7.5,最适装液量60mL/250mL。通过正交试验设计及优化实验,得到各因素及水平的最佳组合,即碳源为葡萄糖,氮源为玉米粉,初始pH值为8,装液量为60mL。 本实验还对γ-谷氨酰基转肽酶的酶促反应进行了研究。酶促反应最适温度为35℃,最适pH值7.5,以及金属离子Ca~(2+)和Mg~(2+)对GGT活性有激活作用,而Cu~(2+) ,Mn~(2+)和Zn~(2+)对酶活性有抑制作用。……   
[关键词]:γ-谷氨酰转肽酶;诱变;培养基优化;酶促反应
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年