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安徽省部分猪场生猪沙门氏菌带菌情况与耐药性研究

张玮

   沙门氏菌(Salmonella)是一类重要的食源性致病菌,在人类健康和畜禽养殖中引起严重的危害。近三十年来,沙门氏菌的耐药性出现了明显的增强,多重耐药谱不断增宽,为沙门氏菌病的预防和治疗带来了极大的困难。生猪作为沙门氏菌的主要贮藏宿主之一,在沙门氏菌的散播及其对食品的污染方面扮演着重要的角色。 利用PCR与常规技术相结合的方法,对安徽省不同地区六个规模化猪场三个生长阶段临床健康猪进行沙门氏菌的分离鉴定。共采集直肠棉拭子样品540份,分离到沙门氏菌22株,检出率为4.07%(22/540)。其中哺乳阶段的检出率为1.67% (3/180)、保育阶段为9.44%(17/180)、生长阶段为1.11% (2/180)。在被调查的六个猪场中,以安庆地区猪场的检出率最高,为18.89%(17/90)。22株沙门氏菌分离株分属三个血清群,其中B群3株,E1群2株,F群17株。对15种抗生素的感受性试验中,22株沙门氏菌对羟氨苄青霉素和四环素的耐受率最高,均为90.9%,而对头孢曲松和头孢哌酮最敏感,敏感率均达100%。耐4种以上抗生素的多重耐药菌株占分离菌株的90.9%(20/22),多重耐药谱为AMX-TET-KAN-CHL-FFC。表明安徽省部分规模化猪场不同生长阶段临床健康猪不同程度携带有沙门氏菌,分离菌株耐药性严重,多重耐药率极高。大多数分离菌株属于较少见的F群。 运用PCR技术检测了沙门氏菌分离菌株的I类整合子和19种耐药基因。22株沙门氏菌有19株检测出I类整合子,检出率为86.4%(19/22)。对基因组和质粒DNA进行19种耐药基因检测,分别共检测出11种和8种耐药基因。建立了氨基糖苷类耐药基因三重PCR;氯霉素类耐药基因三重PCR和四环素类耐药基因两重PCR方法。既提高了检测效率,又保证检测的灵敏度和特异性。从检测的耐药基因中选择检出率最高的aph(3)-IIa为靶基因成功的建立了aph(3)-IIa基因的荧光定量PCR方法,最低检测度为8copies/μL。通过对22株沙门氏菌基因组DNA和质粒上aph(3)-IIa基因的定量检测,显示该方法能够快速、有效的检测出沙门氏菌所携带的aph(3)-IIa基因。表明荧光定量PCR方法具有快速、灵敏、特异性强的特点,可替代普通PCR方法来进行耐药基因的检测。22株沙门氏菌耐药基因调查发现I类整合子的携带与多重耐药性之间关系密切,耐药表型测定结果与耐药基因检测结果一致,基因组DNA携带的耐药基因种类多于质粒。……   
[关键词]:沙门氏菌;血清群;多重耐药;耐药基因;复合PCR;荧光定量PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年