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酸枣和西吕枣高频率不定梢诱导及酸枣遗传转化的研究

王妍

   枣树(Zizyphus jujuba Mill.)是我国重要的经济林果之一,也是枣区人民脱贫致富的重要产业,在我国大部分地区广泛种植。枣疯病是由植原体引起的枣树上的一种毁灭性传染病害,给我国的枣树生产造成巨大的经济损失。本实验拟通过建立并完善枣树的高效离体叶片再生体系和遗传转化体系,以泰山酸枣无菌叶片为外植体,利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部特异表达启动子At-SUC2驱动下的报告基因GUS和抗菌肽基因AG转入枣中,以期使枣树获得抗植原体病的能力,提高枣树对枣疯病的抗性。本实验获得的主要结果如下: 1、泰山酸枣和烟台西吕枣的休眠枝经室内水培后萌发的新梢,经过一系列消毒后成功建立了各自的无菌苗快繁体系。 2、建立了泰山酸枣离体叶片高效不定梢再生体系,不定芽启动的最佳培养基激素组合为TDZ 1.0mg/L+ IAA 0.5mg/L;不定芽伸长的最佳培养基的激素组合为IAA 0.1mg/L+ GA 0.5mg/L。暗培养是不定芽再生的必需条件,在最适宜的不定芽再生培养基上,叶片直接光培养,不定芽不能再生;叶片先进行暗培养3周后转入光下培养,叶片不定芽再生效果最好,再生率最高可达100%。泰山酸枣的最佳生根诱导培养基为1/4MS+ IBA 0.5mg/L,酸枣生根率高达98.5%,单株根数为4.1;与先进行10d的暗处理相比,直接光培养更有利于酸枣不定根的诱导。 3、建立了烟台西吕枣离体叶片高效不定梢再生体系,不定芽启动的最佳培养基激素组合为TDZ 1.0mg/L+ IAA 0.5mg/L;不定芽诱导伸长最佳培养基的激素组合为BA 0.1mg/L+ IBA 0.5mg/L。WPM培养基比MS培养基更适合诱导西吕枣的离体叶片不定梢再生。西吕枣的最佳生根培养基为:1/4 MS +IBA 0.5mg/L,生根率高达100%,单株根数为6.1;与直接进行光培养相比,接种后先暗培养10d更有利于西吕枣试管苗的生根。 4、完善了酸枣的遗传转化体系,Km对枣树不定芽的分化和生长具有抑制作用,叶片分化不定芽的Km临界浓度为20 mg/L,不定芽正常生长的临界浓度为25 mg/L。转化时再生培养基中添加25 mg/L Km用来筛选抗性转化芽。 5、对部分抗Km的抗性转化芽扩繁后进行了GUS表达的组织化学检测,结果未发现GUS基因在Km的抗性转化苗的韧皮部中表达,通过PCR分析也未发现AG基因整合到Km的抗性转化苗的基因组中所期望大小的扩增片段,这些抗Km的绿苗是基因的瞬间表达,还是Km抗性是假阳性,都有待于进一步研究。这说明酸枣做为转化的受体用来插入外来的基因是比较困难的,可能与酸枣在自然的长期进化中已形成了比较稳定的基因型有关。……   
[关键词]:泰山酸枣;西吕枣;叶片;暗培养;不定芽;植株再生
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2010年
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