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超氧阴离子自由基和过氧亚硝酸根离子荧光测定法的研究

蒲法章

   自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物,其中超氧自由基(O_2·~-)和过氧亚硝酸根离子(ONOO-)是具有代表性的两种自由基,它们在各种致病过程中都是重要的介导因素,与癌症、机体炎症、组织过氧化、蛋白质交联变性、DNA损伤和细胞信号转导等都有着直接的关系。 O_2·~-不仅自身具有毒性,而且可以经过一系列反应生成其它活性氧自由基,进一步对生物体产生损伤作用,且停留时间较长。超氧自由基是生物活性最高的氧中心自由基之一,它在生命过程和化学反应中作为电子受体,形成不同的活性氧自由基链中的第一个自由基,经过一系列反应生成其它的氧自由基。和其它的活性氧相比,超氧自由基不是很活泼,但其寿命很长,因此,超氧自由基危害较大,捕获超氧自由基进行研究具有重要的意义。 ONOO-是NO·与O_2·~-相互反应的产物。ONOO·能导致DNA损伤、酶抑制、细胞死亡和细菌中毒并且能够引起一系列疾病。通过对自由基的检测研究,可以帮助我们更好的解释疾病产生的原因,采取有效的预防措施,减少机体的伤害程度。 目前测定O_2·~-与ONOO-的方法主要有电子自旋共振法(ESR)或电子顺磁共振法(EPR)、高效液相色谱法(HPLC)、化学发光法(CL)、荧光法以及电化学方法等。然而,由于生物体内活性氧自由基的半衰期非常短,稳态浓度极低,所以真正适用于检测生物活体内O_2·~-与ONOO-的方法还是比较少的。这就迫切需要科研工作者开发对O_2·~-与ONOO-能够专一识别、快速响应的荧光探针用以动态观测研究某些器官中活性氧自由基的产生、代谢、相互转化及其动态损伤生物机体的过程。 本论文利用荧光分析技术测定活性氧自由基的方法,此技术具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点。本文合成了三种新型荧光探针,利用探针对(O_2·~-)和(ONOO-)进行了检测,提出了新的检测方法。具体研究内容分为以下三个方面: (1)设计合成了一种新型的荧光探针香草醛缩苯胺,建立检测O_2·~-和SOD活性的荧光方法,研究测定方法的最佳条件,并用于测定大蒜﹑洋葱的SOD活性的测定,并与邻苯三酚自氧化法测定出的SOD活性进行了比较。 (2)设计合成新型的荧光探针荧光素酰肼,用荧光光谱法检测ONOO-,研究测定方法的最佳条件,探讨了其它物质对体系的干扰影响及荧光探针的检测单一性,研究测定方法的灵敏度,精密度。 (3)设计合成新型的荧光探针罗丹明6G酰肼,用荧光光谱法检测ONOO-,研究测定方法的最佳条件,探讨了其它物质对体系的干扰影响及荧光探针的检测单一性,研究测定方法的灵敏度,精密度。……   
[关键词]:荧光分析法;超氧阴离子自由基;过氧亚硝酸阴离子;超氧化物歧化酶;荧光探针
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2010年