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抑瘤宁对荷人结肠癌HCT-8裸鼠的抑癌作用及对血管内皮生长因子及微血管密度的作用

张小杰

   背景:恶性肿瘤是严重威害人类健康的一种疾病,由于大多数肿瘤发现时已为晚期,目前对晚期肿瘤的治疗无论是手术、化疗、放疗还是免疫疗法等,都各有其适应症和禁忌症。总的来说,综合治疗,也就是中西医结合、内外兼顾的治疗较为理想。近年来,国内外越来越多的学者热衷于研究中医药对恶性肿瘤的治疗作用,从抗肿瘤中药的单药到中药复方制剂都取得了可喜的成果。如抗肿瘤单味中药:紫杉醇、喜树碱衍生物,中药复方制剂如:康莱特注射液在非小细胞肺癌等肿瘤的治疗,华蟾素在消化系肿瘤的应用,消癌平在胃癌食管癌等多种肿瘤中的应用。这些足以说明中药抗肿瘤有广阔的前景,本实验中的抑瘤宁由冬凌草、龙葵、刺五加、蛇莓四味中药成分组成,具有清热解毒、消肿散结、扶正固本、补益健脾之功效。前期对抑瘤宁的体外实验研究已取得了一定成果,本实验将继续从体内实验探讨抑瘤宁的作用及其作用机理。 第一部分 抑瘤宁对荷人结肠癌HCT-8裸鼠的抑癌作用 目的: 通过建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,给于抑瘤宁治疗,检测抑瘤宁对人结肠癌原位移植瘤生长的影响。方法: 购买4周龄BALB/c雄性裸小鼠30只,体重20克左右,于无特定病原体(specified. pathogens free, SPF)环境下饲养,环境温度、湿度适宜,无菌饲料及灭菌纯净水饲养,在37℃含5%C02培养箱中培养人结肠癌细胞株HCT-8,取对数生长期的结肠癌细胞,用生理盐水制作成细胞密度为10×107/ml的细胞悬液。在裸鼠右侧腋窝皮下接种上述细胞悬液0.2ml建立种植瘤模型,定期观察,游标卡尺测量肿瘤的长径(a)、短径(b),按公式V=ab2/2,计算肿瘤近似体积,接种14天后形成稳定的皮下移植瘤。随将30只裸鼠随机分为5组,空白对照组、希罗达组、抑瘤宁低、中、高剂量组。抑瘤宁的三种浓度分别为35%、70%、105%,希罗达浓度为2%,空白对照组给蒸馏水,均按照0.2ml/10g(裸鼠体重)灌胃给药,每天一次,连续用药4周,末次用药24小时后颈椎脱臼处死小鼠,切取种植瘤组织,心肝脾肺肾脏器,置于4%多聚甲醛溶液中固定,观察各组裸鼠的一般状况,各组原位移植瘤的瘤体积,瘤重及用药前后裸鼠体重的变化,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。 结果: 1、30只裸鼠实验期间无一死亡,成瘤率为100%,成瘤时间为接种后6-10天,于接种后14天肿瘤直径平均达5mm,造模成功。 2、空白对照组裸鼠肿瘤迅速生长,生长曲线较陡直;,其余各组肿瘤生长缓慢(P<0.01),生长曲线在较长的一段时间内均较平缓;空白对照组、希罗达组、低剂量组、中剂量组和高剂量组用药前后体重差分别:8.5200±0.99599、-3.4167±2.38446、2.6333±0.55737、4.0000±0.40000、6.4759±1.10348,希罗达组与空白组相比差异有显著性(P<0.01)抑瘤宁低、中、高、剂量组与空白组比较差异均有统计学意义:高剂量组(P<0.05),抑瘤宁低、中剂量组(P<0.01).空白组、希罗达组、低、中、高剂量组平均瘤重(g)分别为:1.4683±0.16845、0.8567±0.12388、1.2333±0.29132、1.1583±0.17646、1.0150±0.17695。希罗达组、低剂量组、中剂量组和高剂量组与空白组相比差异有显著性:希罗达(P<0.01)低、中、高剂量组(P<0.05);各组抑瘤率分别为:希罗达组42.18%;低剂量组16.33%;中剂量组21.77%;高剂量组31.29%;和空白组相比差异有统计学意义(P<0.05)。 结论: 抑瘤宁对荷人结肠癌裸鼠有抑癌作用。 第二部分 瘤宁抑制荷HCT-8人结肠癌裸鼠移植瘤的机理探讨 目的: 研究抑瘤宁抑制荷HCT-8人结肠癌裸鼠移植瘤的作用机制。 方法: 取第一部分各组裸鼠移植瘤和裸鼠脏器的石蜡标本,进行常规HE染色、SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的MVD,VEGF表达和各组脏器情况。 结果: 1、各组动物的心肝脾肺肾脏器的HE染色镜下未见明显毒性表现;各组的肿瘤组织的HE染色镜下均可见明显的细胞核异常现象:核大,深染,多核,核碎裂等现象。 2、VEGF蛋白表达主要位于细胞胞浆、核膜上,为棕黄色或褐色颗粒;第v111因子显色主要位于细胞胞浆、核膜上,也为棕黄色或褐色颗粒。空白组、希罗达组、低剂量组、中剂量组和高剂量组瘤组织内的VGEF蛋白表达阳性百分率分别为45.1667±2.71416、26.1667±1.16905、36.3333±2.94392、33.5000±0.83666、30.4000±6.70358,各个用药组和空白组比较差异均有显著性(p<0.01),微血管密度(MVD)平均值分别为:34.3333±3.07679、12.1667±1.72240、26.8333±3.18852、23.5000±2.88097、20.1667±1.47196,各个用药组和空白组比较差异同样均有显著性(p<0.01),有统计学意义。 结论: 抑瘤宁抑制荷HCT-8人结肠癌裸移植瘤生长的作用机制可能是下调血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,并进而减少微血管密度(MVD)的表达,抑制肿瘤血管生成从而达到抗癌的作用。但对裸鼠的心肝脾肺肾无明显毒性。……   
[关键词]:抑瘤宁;裸鼠;HCT-8人结肠癌;血管内皮生长因子;微血管密度
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2010年
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