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四种药物的毛细管电泳电化学发光法分析

张颖

   毛细管电泳(CE)是一种高效的分离分析工具,具有进样量少,分辨率高,灵敏度高,选择性好,操作成本低等优点。电化学发光(ECL)具有操作简单,背景噪音低,线性范围宽等优点。近年来,CE-ECL联用技术倍受关注,越来越多的应用于痕量、复杂样品的分离分析。 本论文利用CE-ECL联用技术,建立了四种药物——盐酸托莫西汀、盐酸林可霉素、甲硝唑和盐酸麻黄碱测定的分析方法体系;研究了盐酸托莫西汀、盐酸麻黄碱与细胞色素C、肌红蛋白及牛血清白蛋白三种蛋白的相互作用。本研究所获得的结果为上述四种药物的快速测定及实验研究提供了新的方法参考和依据。具体内容如下: 1.通过实验条件的优化,首次建立了测定盐酸托莫西汀的毛细管电泳-电致化学发光分析体系。通过对盐酸托莫西汀胶囊、大鼠口服给药血浆浓度的测定,考察了方法的可行性。结果表明,在最佳的实验条件下:检测电位为1.15V;检测池中联吡啶钌的浓度为5 mmol/L,磷酸盐缓冲液浓度为70mmol/L(p H8.0);电动进样条件为12kV×10 s;分离电压为12.5 kV;分离缓冲液为30 mmol/L (pH7.5)的磷酸盐缓冲液。所建立的方法体系可用于盐酸托莫西汀胶囊及血浆样品中盐酸托莫西汀的测定,为盐酸托莫西汀实际样品的分析提供了新的方法。 2.由于毛细管电泳-电致化学发光分析体系能够满足对盐酸托莫西汀的分析测定,据此首次利用本体系研究了盐酸托莫西汀与三种蛋白——牛血清白蛋白(BSA)、细胞色素C(Cyt-C)和肌红蛋白(Mb)的相互作用,并且计算了它们之间的结合常数分别为9.51×103L/moL、1.15×104L/moL和7.38×103L/moL,结合位点分别为15.23、10.19和17.15。 3.建立了毛细管电泳-电化学发光(CE-ECL)法测定盐酸林可霉素注射液中盐酸林可霉素含量的新方法。研究了检测电位、磷酸盐缓冲液浓度和pH值、分离高压、进样电压和进样时间、分离缓冲液的浓度和pH值等实验条件对盐酸林可霉素分离检测条件的影响,得到了优化的实验条件。盐酸林可霉素在5×10-8~9×10-6g/mL范围内呈良好线性,检出限为1.55×10-8g/mL,回收率为96.14%~100.29%。 4.建立了毛细管电泳-电化学发光(CE-ECL)法测定甲硝唑注射液中甲硝唑含量的快速、灵敏的新方法。实验得到测定甲硝唑的最优条件:检测电位1.20V、5 mmol/L的联吡啶钌、磷酸盐缓冲液浓度为60 mmol/L (pH 7.0)、分离高压为15kV、进样高压为10 kV、进样时间为14s、分离缓冲液的浓度为15 mmol/L (pH7.0)。在此条件下,甲硝唑在8×10-8~2×10-6g/mL范围内呈良好线性(R2=0.997),检出限为9.7×10-9g/mL,并成功的应用于两个不同厂家的甲硝唑注射液和一个厂家的甲硝唑葡萄糖注射液中的甲硝唑含量的检测,回收率为99.01%~100.75%。 5.将毛细管电泳与Ru(bpy)32+电化学发光检测技术相结合,应用于对盐酸麻黄碱的检测。在优化的实验条件下,其浓度线性范围为6×10-8~6×10-6g/mL;检出限(S/N=3)为4 .51×10-9g/mL。本方法快速准确,成功应用于呋麻滴鼻液中盐酸麻黄碱含量的测定,回收率为96.14%~100.29%。 6.本论文利用CE-ECL检测方法,首次建立了盐酸麻黄碱与牛血清白蛋白(BSA)、细胞色素C(Cyt-C)和肌红蛋白(Mb)这三种蛋白相互作用的新方法,并且计算了它们之间的结合常数分别为1.55×104 L/moL、6.58×103 L/moL和1.59×104L/moL,结合位点分别为8.52、12.60和10.66。……   
[关键词]:毛细管电泳;电化学发光;蛋白;相互作用
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2010年