手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

游离SiO_2粉尘体外诱转肺成纤维细胞抑制筛选

张光辉

   矽肺是机体吸入大量含有游离SiO2粉尘引起的肺部疾病。大多数矽肺的发生是一个慢性过程,主要伴随着大量的矽性蛋白沉积。其病理特征为肺泡腔内有大量的蛋白分泌物,随后可伴有纤维组织弥漫增生,形成小纤维灶乃至矽结节。成纤维细胞在其中起到重要作用。游离SiO2粉尘能够激活肺成纤维细胞,成纤维细胞激活后表达a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)转化为肌成纤维细胞,能够大量分泌细胞外基质,尤其是胶原纤维,是肺部蛋白沉积的主要因素。 因此,抑制肺成纤维细胞的激活,抑制其蛋白的分泌,尤其是胶原蛋白的分泌是抑制矽肺发生发展的重要环节。通过体外分离培养SD大鼠肺巨噬细胞、肺成纤维细胞。应用游离SiO2粉尘刺激巨噬细胞后取培养上清诱转肺成纤维细胞,研究RGD短肽、秋水仙碱、干扰素a-1b和甲磺酸伊马替尼对诱转后肌成纤维细胞的抑制作用,为进一步对肺纤维化的治疗研究提供参考依据和基础资料。 目的:观察RGD短肽、秋水仙碱、干扰素-a1b和甲磺酸伊马替尼对游离SiO2刺激引起的肺成纤维细胞激活效应的体外抑制作用。寻求合适的肺肌成纤维细胞的抑制剂。 方法:1用无血清的游离SiO2粉尘培养基刺激巨噬细胞(AM)24 h,收集培养液上清并离心去除SiO2, SiO2组用收集所得的上清培养肺成纤维细胞(LF);正常组用无游离SiO2粉尘刺激的AM上清培养LF。受游离SiO2粉尘刺激的AM上清培养基中加入RGD短肽、或秋水仙碱、或IFN-a1b、或IM,培养LF24 h。 2应用MTT实验测定细胞的活性;应用real-time PCR检测a-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA水平;应用ELISA法测定COLⅠ和COLⅢ的分泌;BradFord定氮法用来测定培养上清中的总蛋白。 结果:1 RGD对游离SiO2粉尘诱转LF的活性,各RGD浓度组与SiO2组差异没有统计学意义。各RGD浓度组的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于SiO2组,其中在100μg/ml和150μg/ml浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。 2秋水仙碱对诱转LF的活性,各秋水仙碱浓度组低于SiO2组,差异有统计学意义(P<0.05),LC25是40μmol/L。各秋水仙碱浓度组的a-SMA、COLⅠ和COLⅢ的mRNA水平低于SiO2组,其中在80μmol/L浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。各秋水仙碱浓度组的COLⅠ和总蛋白的分泌水平低于Si02组,其中COLⅠ和总蛋白在80μg/ml浓度组时,差异有统计学意义(P<0.05)。 3IFN-a1b对诱转LF的活性,差异有统计学意义(P<0.05),LC25是100 u/ml。各IFN-a1b浓度组的a-SMA、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白分泌水平均低于Si02组,其中在100u/ml浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。 4 IM对诱转LF的活性,差异有统计学意义(P<0.05),LC50是5μmol/L。各IM浓度组的a-SMA、COLⅠ和COLⅢ的mRNA水平低于Si02组,其中在5μmol/L浓度组时,差异均有统计学意义(P<0.05)。各IM浓度组的COLⅠ、COLⅢ和总蛋白的分泌水平低于Si02组,其中COLⅠ和COLⅢ在5μmol/L浓度组时差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:1秋水仙碱、干扰素-alb和IM抑制了肌成纤维细胞的活化。 2 RGD、秋水仙碱、干扰素-alb和IM能够抑制肌成纤维细胞的COLⅠ、COLⅢ等细胞外基质的表达。……   
[关键词]:RGD;秋水仙碱;干扰素-a;甲磺酸伊马替尼;二氧化硅;肺成纤维细胞;胶原蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2010年