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半夏软腐病根际拮抗细菌的筛选及其鉴定

李艳华

   半夏是我国中药宝库中的大宗药材,为解决供需矛盾和保护野生资源,我国从20世纪70年代开始半夏野生变家种及其栽培技术研究。半夏软腐病是由胡萝卜果胶杆菌(Pectobacterium carotovora)引起的病害,该病发生普遍,严重威胁着半夏的规模化绿色生产。本论文针对半夏生产中的主要病害——软腐病,从生物防治途径出发,进行了半夏软腐病根际拮抗菌的分离、筛选及鉴定,以期为半夏的生物防治技术开发奠定基础。 2006年6~10月从浙江和山东两省的半夏种植地采集根际土壤样品,从这些样品中分别分离细菌,获得细菌分离物317个。对这些细菌分离物在培养平板上进行拮抗筛选,得到拮抗菌10株。以半夏球茎及其切片为材料,对10株拮抗菌进行了拮抗活性筛选,结果4个菌株显著减轻半夏切片和球茎的软腐病症状。选择在球茎上具有较好生防效果(60%以上)的拮抗菌继续在半夏组培苗上进行复筛。结果,2个拮抗菌P-Y2-2和GJ1-8显著抑制组培苗的软腐病菌发生,防治效果分别为100.00%和93.34%,但拮抗菌L1-5对组培苗没有抑制作用。进一步验证拮抗菌P-Y2-2和GJ1-8对半夏植株的生防效果,结果它们对半夏植株软腐病的生防效果分别为66.67%和50.00%。 拮抗谱研究表明,3个拮抗菌对23个细菌和真菌病原菌具有不同的拮抗效果,其中拮抗菌P-Y2-2和L1-5分别可抑制其中8个和9个病原菌的生长,拮抗菌GJ1-8仅能抑制4个病原菌的生长;对于7个非致病菌的拮抗作用表明,3个拮抗菌仅能抑制其中2个非致病菌的生长。可见3个拮抗菌的拮抗谱均较窄,尤其是对细菌的拮抗谱较窄,表现对半夏软腐病原菌具有一定的专性抑制作用。从微生物生态学的角度而言,一定的专性抑制作用不会对植株原有的微生物生态产生较大影响,这对于生防菌在生物防治中的实际应用具有重要意义。 应用传统方法和分子生物学方法对生防效果显著的3个拮抗菌进行了初步鉴定。形态学、生理生化及16Sr RNA和gyrB基因序列分析表明:拮抗菌P-Y2-2为泛菌属菠萝泛菌Pantoea ananatis;GJ1-8属于类香菌属香味类香味菌Myroides odoratimimus菌;L1-5为恶臭假单胞菌Pseudomonas putida。目前已报道与软腐病防治相关的细菌主要是假单胞菌属和芽孢杆菌属细菌,而泛菌属、类香菌属细菌应用于软腐病害的防治报道较少。泛菌属、类香菌属属拮抗菌的获得为半夏软腐病的生物防治提供了新材料。……   
[关键词]:半夏;软腐病;拮抗菌;筛选;鉴定
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江理工大学2010年