手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

抗生素iso-migrastatin发酵条件优化和高产机理研究

吴雪云

   Iso-Migrastatin (iso-MGS)是从S. platensis NRRL18993发酵液中分离得到的12元环的大环内脂类抗生素,具有抑制肿瘤细胞转移的生物学活性。利用基因工程技术,将携带有完整iso-MGS基因簇的载体pBS11001整合到五种不同模式菌株的染色体上,成功构建五种生物合成iso-MGS的工程菌株。 本论文开展了iso-MGS工程菌的发酵培养条件优化的工作,通过培养基优化,五种工程菌异源生物合成iso-MGS的能力均得到提高,iso-MGS的产量提高了3-18倍不等,通过对比可以看出工程菌SB11001合成iso-MGS的能力明显高于其余四种工程菌,最高产量为128.6 mg/L,该菌也成为进一步组合生物合成iso-MGS的首选的工程菌。通过组合不同培养基之间的成分摸索出更适宜iso-MGS合成的培养基,摸索出一种组合B2培养基,使iso-MGS的产量进一步提高到186.7 mg/L,同时为异源生物合成其他天然产物所需培养基提供了借鉴。根据文献中报道的iso-MGS的假想生物合成路径,本实验验证了添加假想前体碳酸氢钠对iso-MGS产量的影响,添加2 g/L碳酸氢钠使iso-MGS的产量继续提高到207.8 mg/L。利用实时荧光定量RT-PCR技术研究野生菌和工程菌的mgs基因簇中每个基因在不同时期的表达丰度,从而发现与iso-MGS产量密切相关的基因,为进一步组合生物合成iso-MGS选择靶基因提供了理论基础。……   
[关键词]:异源生物合成;发酵条件优化;假想前体;荧光定量RT-PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江理工大学2010年