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五种牙体修复材料对L929细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因的研究

王学

  牙科陶瓷具有生物相容性好、美观、色泽稳定、菌斑积聚少、低热传导率、耐磨损、修复体颈缘美观等特性,是其它修复材料如金属和塑料材料无法替代的。由过去单纯制作嵌体、贴面发展到全冠、固定桥,乃至种植义齿的上部结构。本课题组采用以硅藻土为原料,通过添加纳米增韧剂(纳米氧化锆,氧化铝,二氧化钛晶须等)提高其强度,制备了符合临床要求的牙科可切削陶瓷材料。 钴铬合金烤瓷、镍铬合金烤瓷及树脂也是目前临床常见的修复材料。但是有文献报道金属合金作为口腔修复材料应用于人体内在人体生理环境中使用对生命有机体会产生一定的作用和影响。生物相容性评价是研究医用金属材料的重要内容之一。 本研究从细胞生物学及分子生物学角度对五种口腔修复材料的生物相容性进行了评价,主要目的是通过细胞培养,MTT法,流式细胞术来检测五种牙科修复材料对于L929细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡方面的影响进而评价其生物相容性。通过RT-PCR检测Bcl -2和Bax mRNA表达来探讨五种牙体修复材料引起细胞凋亡的机制,同时为提出生物相容性评价的新指标提供理论依据。 实验一五种牙体修复材料对L929细胞增值率的影响 目的:检测一种新型硅藻土可切削陶瓷的细胞毒性并与其他四种牙体修复材料相比较,初步评价其生物相容性。 方法:小鼠成纤维细胞L929在新型硅藻土可切削陶瓷浸提液中培养1d,3d,5d,并与其他四种牙科常用修复材料作比较,MTT法观察细胞形态变化,测量吸光度(OD值),计算细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别。 结果:阴性组,新型硅藻土可切削陶瓷组,铸瓷组,钴铬合金烤瓷之间无统计学差异(P>0.05)。阴性组与树脂,镍铬合金烤瓷之间存在统计学差异(P<0.05)。所有材料细胞毒性级别都在1级。 结论:五种牙体修复材料均无明显的细胞毒性。 实验二五种牙体修复材料对L929细胞周期的影响 目的:通过研究新型硅藻土可切削陶瓷及临床常用四种口腔修复材料对L929细胞周期的作用,初步评价其生物相容性。 方法:分别提取新型硅藻土可切削陶瓷及四种临床常见口腔修复材料的浸提液作用于L-929细胞,流式细胞仪检测细胞周期进程。 结果:五种牙体修复材料组细胞周期与阴性组无统计学差异(P>0.05)。 结论:五种牙体修复材料对细胞周期均无特殊影响。 实验三五种牙体修复材料对L929细胞凋亡的影响 目的:通过研究新型硅藻土可切削陶瓷及临床常用四种口腔修复材料对L929细凋亡作用,初步评价其生物相容性。 方法:分别提取新型硅藻土可切削陶瓷及四种临床常见口腔修复材料的浸提液作用于L-929细胞,流式细胞仪检测诱导细胞凋亡作用;Annexin V-FITC/PI双染凋亡试剂盒对细胞死亡类型进行定量检测。 结果:新型硅藻土可切削陶瓷凋亡率与铸瓷较低,并与阴性组接近(P>0.05);其他3种材料凋亡率远高于阴性组。新型陶瓷主要引起的细胞病变为凋亡,并呈时间依赖性。树脂凋亡率最高,细胞坏死水平也显著提高,与新型陶瓷有统计学差异(P<0.05)。 结论:五种牙体修复材料凋亡水平存在差异,凋亡检测可能成为评价材料生物相容性的新方法之一。 实验四五种牙体修复材料对L929细胞凋亡相关基因的影响 目的:通过研究新型硅藻土可切削陶瓷及临床常用四种口腔修复材料对L929细胞凋亡相关基因作用,初步评价其生物相容性。 方法:分别提取新型硅藻土可切削陶瓷及四种临床常见口腔修复材料的浸提液作用于L-929细胞,反转录聚合酶链反应(PT-PCR)从分子水平上检测Bcl-2及Bax基因的表达。 结果:RT-PCR结果显示,新型硅藻土可切削陶瓷组、铸瓷组Bcl-2及Bax mRNA表达水平都与阴性组接近,差异无统计学意义(P>0.05)。树脂Bax mRNA表达量最高,Bcl-2 mRNA表达量最低,与新型陶瓷组间差异有统计学意义(P<0.05)。镍铬合金烤瓷组及钴铬合金烤瓷组Bcl-2及Bax mRNA表达水平与阴性组有统计学差异(P<0.05)。 结论:五种牙体修复材料凋亡相关基因水平有差异,基因表达检测可能成为评价材料生物相容性的新方法之一。……