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芍药苷对人胃癌耐药细胞SGC7901/VCR耐药性的影响及机制研究

方申存

  背景和目的:胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,化疗是晚期胃癌的主要治疗方法。尽管近年来新的抗肿瘤药物不断出现,化疗方案亦不断组合更新,但对晚期胃癌患者的疗效改善有限,多数患者仍不能够获得有效的控制,这其中一个重要原因是胃癌对化疗药物产生了耐药性,而导致化疗失败,然而目前应用于临床试验的绝大部分耐药逆转剂都存在着低效、高毒、改变化疗药物的药代动力学等问题,迄今为止,尚无理想的药物应用于临床克服肿瘤耐药。因此寻找高效、低毒克服肿瘤耐药的天然药物是当前肿瘤治疗研究的重要课题之一。芍药苷是芍药的主要活性单体成分,具有抗炎、免疫调节、保肝、神经保护等功。近年有少数体外研究报道证实芍药苷对肝癌和肺癌细胞增殖有明显的抑制作用。本课题组前期研究表明芍药苷可抑制胃癌细胞(SGC-7901)增殖并促进其凋亡,但对耐药细胞株是否具有抑制效应及其作用的分子机制国内外尚未见相关研究报道。本实验以胃癌耐药细胞SGC7901/VCR为对象,研究芍药苷对细胞耐药性的影响及其机制,探讨芍药苷对胃癌耐药的潜在治疗作用。 方法:1.芍药苷单独或联合化疗药物作用于SGC7901/VCR细胞48h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;2.流式细胞术(FCM)检测芍药苷单独或联合长春新碱(VCR)对细胞凋亡率的影响;3.免疫蛋白印迹技术(Western Blot)分析不同浓度芍药苷对Bcl-2、Bcl-xl、Bax及细胞核内NF-κB P65蛋白的表达的影响;4.酶联免疫吸附试验(ELISA)进一步确定核内NF-κB的转录活性; 5.反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测应用芍药苷前后MDR1 mRNA的表达变化;6.流式细胞仪检测不同浓度芍药苷处理后细胞内罗丹明123(Rh123)的蓄积和排出;7.流式细胞术检测应用芍药苷前后细胞表面蛋白P糖蛋白(P-gp)的表达。 结果:1.芍药苷对SGC7901/VCR细胞生长有明显的抑制作用,这种作用呈现剂量依赖性;无毒浓度(80μg/mL)芍药苷能够部分逆转SGC7901/VCR细胞对VCR及5-FU的耐药。2.芍药苷呈现浓度依赖性地促进细胞凋亡,80μg/mL芍药苷联合VCR较单药VCR能够显著诱导细胞凋亡。3. Western Blot和ELISA均证实芍药苷对NF-κB有明确抑制作用;随着芍药苷浓度增加NF-κB、Bcl-xl、Bcl-2表达水平逐渐下调(P<0.01),但对Bax没有明显影响。4.流式细胞仪检测结果呈现芍药苷作用后,细胞内Rh123的荧光强度显著增强;此结果表明芍药苷作用后能显著增加细胞内化疗药物的浓度。5. RT-PCR检测不同浓度芍药苷应用前后mdr1 mRNA的表达无显著变化(P>0.01)。6.流式细胞术检测细胞表面蛋白P-gp的表达,结果提示40μg/mL芍药苷对P-gp蛋白表达没有影响(P>0.01),但80 -320μg/mL芍药苷能够下调P-gp的表达,呈现剂量依赖性(P<0.01)。结论:芍药苷可明显抑制SGC7901/VCR细胞的增殖,诱导其凋亡;同时芍药苷能够部分逆转SGC7901/VCR细胞的多药耐药,其逆转耐药机制可能通过抑制NF-κB的活化,进而下调抗凋亡蛋白(Bcl-xl、Bcl-2)和P-gp。……   
[关键词]:芍药苷;胃癌;凋亡;NF-κB;Bcl-xl;Bcl-2;P-gp
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年