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安体舒通延缓大鼠慢性移植肾肾病进程的实验研究

柏金明

   目的:慢性移植肾肾病(Chronic allograft nephropathy,CAN)是影响移植肾长期存活的主要原因之一,CAN的病理主要表现为间质纤维化、肾小管萎缩及肾小球硬化等。既往研究证实醛固酮(ALD)及下游因子转化生长因子-β1(TGF-β1)在肾脏纤维化发展过程中有重要作用。本研究采用醛固酮受体拮抗剂安体舒通治疗CAN大鼠,探索安体舒通延缓大鼠CAN的作用机制,为临床上治疗CAN、延长移植肾的存活时间提供新的途径。 方法:1.建立大鼠CAN模型:F344和Lewis近交系大鼠作为供、受体,取供体的左肾作为供肾,双人双目显微镜下先摘除受体左肾,行供肾肾静脉与受体肾静脉行端端吻合,供肾肾动脉与受体肾动脉行端端吻合,供肾膀胱瓣与受体膀胱吻合,行原位异体肾移植。术后10d,切除受体右肾。所有大鼠均给予环孢素A(CsA) 10d预防急性排斥反应,1.5mg/kg·d,予皮下注射给药。建立大鼠CAN模型。 2.实验分组:将肾移植大鼠分成3组,每组10只,分别为:A组对照组,供、受体均为Lewis大鼠,受体移植术后予皮下注射CsA(1.5mg/kg?d),共10 d;B组CAN组,以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,受体处理同A组;C组安体舒通组,以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,受体移植术后CsA处理同A组,另予以安体舒通(20mg/kg·d),溶于普通饮用水灌胃,共12 w。 3.移植术后检测指标:术后4、8、12 w分别检测24 h尿蛋白定量、尿肌酐。血清肌酐、血清尿素氮、血清钾、血清钠水平。12 w处死大鼠,取移植肾标本行HE和Masson染色,观察各组大鼠移植肾组织病理学变化(Banff 97评分);采用免疫组织化学法、Western blot检测TGF-β1、骨桥蛋白(OPN)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在移植肾组织中蛋白表达水平。 结果:1.大鼠CAN模型的建立:通过手术训练技术成熟后共进行40例手术,手术成功率85%,手术失败原因主要为吻合口出血及血栓形成。供体、受体手术时间分别为63±17、59±7 min,热缺血时间1 min左右,冷缺血时间为48±10 min。 2.肾移植术后12 w, B组SCr显著高于A组(47.5±7.9 vs 38.8±5.8 umol/L),差异有统计学意义(P<0.05),而C组大鼠的SCr(44.4±6.2 umol/L)较B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。B组BUN显著高于A组(10.1±1.8 vs 6.97±1.0mmol/L),差异有统计学意义(P<0.05),而C组大鼠的BUN(7.84±1.2 mmol/L)较B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。术后12 w,B组的肌酐清除率为1.13±0.9 mL/min,较A组(1.81±1.7 mL/min)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),通过治疗后,C组的CCr则有所升高,为1.36±1.4 mL/min,与B组比较显著升高(P<0.05)。B组24 h尿蛋白定量均超过150mg,显著高于A组(276.8±53.3 vs 62.4±10.9 mg),差异有统计学意义(P<0.01),而C组大鼠的24 h尿蛋白定量(80.4±15.9 mg)较B组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。C组大鼠均未出现高钾血症或低钠血症,与A、B两组比较血清钾和血清钠均没有统计学意义(P>0.05)。A组移植肾组织未见到明显的肾小管萎缩、肾间质纤维化及肾小球病变;B组标本可见广泛CAN改变,包括肾小管间质纤维化和肾小管萎缩,而肾小球萎缩并不明显。根据Banff 97评分标准,B组肾小管萎缩评分显著高于A组(1.7±0.82 vs 0.1±0.30),B组肾小管间质纤维化程度明显重于A组(2.2±0.79 vs 0.3±0.48),差异均有显著性(P<0.01);C组移植肾组织可见较轻微的CAN表现,其间质纤维化及肾小管萎缩的评分分别为0.9±0.57、1.2±0.72,均显著低于B组(P<0.05);A、C组之间Banff评分差异无统计学意义(P>0.05)。 3.术后12 w,免疫组化示A组大鼠肾小管上皮细胞仅见少量TGF-β1表达,B组TGF-β1在移植肾肾小管上皮细胞胞浆及胞膜中呈弥漫性、强阳性表达,其表达阳性率明显高于A组(P<0.05),C组TGF-β1表达阳性率明显低于B组(P<0.05)。A组大鼠移植肾组织只在Henle袢表达少量的OPN,B组OPN大量表达于移植肾肾小管上皮细胞胞浆,其阳性表达率高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),C组OPN表达明显少于B组(P<0.05)。A、C组之间TGF-β1及OPN的免疫组化结果相比较均无统计学意义(P>0.05)。通过对移植术后大鼠移植肾各组Western blot半定量分析发现,B组OPN表达量较A组明显增加(2.1±0.5 vs 0.6±0.1,P<0.05),C组OPN相对表达量为1.1±0.3,明显少于B组(P<0.05);B组α-SMA的表达较其余各组明显增高(P<0.05),A组和C组的相对表达量无统计学意义(P>0.05)。 结论:1.安体舒通可能通过下调TGF-β1、OPN的表达,从而降低α-SMA的表达,发挥抗肾间质纤维化作用,延缓CAN进程。 2.醛固酮在大鼠CAN进程中具有重要的作用,应用其拮抗剂安体舒通安全、有效,副作用小,并且对大鼠CAN的进程有延缓作用。……   
[关键词]:安体舒通;醛固酮;慢性移植肾肾病;肾间质纤维化;TGF-β1;OPN
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年