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半乳糖凝集素-3在邻苯二甲酸二丁酯致大鼠尿道下裂发生中的表达变化研究

常俊锴

   目的:利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导大鼠尿道下裂的发生,分离与鉴定尿道下裂与正常大鼠阴茎中差异表达蛋白,并验证半乳糖凝集素-3的表达变化,初步探讨其在尿道下裂发生中的作用。 方法:孕SD大鼠20只,随机分为2组,妊娠14~18天,实验组和对照组分别予DBP 800mg/(kg·d)、大豆油2ml/d灌胃,妊娠19天取出实验组尿道下裂雄性仔鼠与对照组雄性仔鼠阴茎,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白点利用质谱技术进行鉴定,并运用Western blotting和免疫组织化学方法分析半乳糖凝集素-3的表达变化。 结果:实验组尿道下裂发生率为40%,对照组无尿道下裂发生。二维凝胶电泳分析共得到51个差异表达蛋白,其中21个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,这些蛋白主要与组织分化与生长调控等有关,如半乳糖凝集素-3、核纤层蛋白B1、乳酸脱氢酶B等。运用Western blotting,我们验证了galectin-3在实验组表达量明显低于对照组,通过免疫组化方法,发现galectin-3主要定位在仔鼠尿道上皮细胞中,尿道下裂组染色强度明显弱于对照组。 结论:蛋白质组学是研究DBP的生殖系统发育毒性的有效方法,所鉴定的差异表达蛋白为深入探讨DBP导致尿道下裂发生的作用机制提供了依据。染毒期间DBP下调阴茎中galectin-3的表达,影响了上皮细胞增殖、凋亡及尿生殖褶的融合,这可能是DBP诱发尿道下裂的机制之一,但其功能有待进一步研究,本实验获得的其他蛋白质亦有待进一步验证及深入研究。……   
[关键词]:邻苯二甲酸二丁酯;尿道下裂;阴茎;蛋白质组学;半乳糖凝集素-3
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年