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雷公藤甲素对肝癌细胞化疗敏感性的影响

刘养岁

  原发性肝癌在全世界恶性肿瘤中居第四位,死亡率居第三位。外科手术切除是最好的治疗方法,能够有效的改善病人的生活质量,提高病人的生存时间。但是超过80%的肝癌病人发现时失去手术切除的机会,即使行根治性切除术后2年转移和复发率仍高于50%以上。而对于大多数失去手术机会的患者寻求其他治疗方法显得尤为重要。现有肝癌对化疗药物选择性低、毒素作用严重,且容易产生耐药性,严重限制了临床应用及疗效的进一步提高。因此寻找能增加化疗敏感性的药物是目前肝癌治疗领域内的研究热点之一。雷公藤甲素(triptolide,TP)是从雷公藤中提取出来的一种活性单体成分,有着广泛的免疫抑制作用,已经在我国应用多年。近几年来发现TP在抗肿瘤方面也具有明显效果,能够抑制许多肿瘤细胞的生长。但将TP联合化疗药物应用到肝癌细胞中鲜见报道。本实验应用TP联合不同浓度顺铂(cisplatin,CDDP)和5-FU体内外干预人肝癌细胞,探讨TP对肝癌细胞化疗敏感性的作用及其可能的机制。 【目的】 探讨TP对肝癌细胞化疗药物敏感性影响及其可能的机制。 【方法】 应用5-FU、顺铂和TP单独或联合作用于体内外培养的肝癌细胞系HepG2、SMMC7721细胞不同时间,MTT方法观察药物对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western Blot方法分析细胞胞核中Bax、Bcl-2、p21、p53蛋白表达变化;Caspase-3活性检测试剂盒分析其凋亡机制;观察体内荷瘤裸鼠肿瘤生长情况。 【结果】 1.体外应用TP能够增加肝癌细胞化疗药物抑制作用: 结果显示,不同浓度TP处理肝癌细胞48h后,能够明显抑制细胞增殖,且呈浓度依耐性;5-FU和CDDP也能显著抑制肝癌细胞生长抑制率,将TP(20ng/ml)联用顺铂或5-FU与单用药比较,明显提高细胞生长抑制率(P <0.05)。 2.体外应用TP增加肝癌细胞化疗药物凋亡率:流式细胞术分析细胞凋亡结果显示,单用TP、DDP和5-FU作用于HepG2或SMMC7721细胞48h后,细胞凋亡率均较对照组升高(P <0.05);联合用药后细胞凋亡率显著性升高,与单用药组比较具有统计学意义(P <0.05)。 3.TP阻止肝癌细胞Bcl-2和P21表达,抑制P53和Bax表达:应用TP后肝癌细胞中Bcl-2和P21蛋白表达较未用药组明显降低,联用顺铂或5-FU后能进一步降低Bcl-2和P21的蛋白表达。Bax和p53表达相反,TPL可诱导Bax和p53表达,联用化疗药物后能进一步诱导其表达。 4.体外应用TP增强化疗药物诱导细胞中ROS和caspase-3活性增加:单用TP和化疗药物作用24h后,细胞内ROS和Caspase-3活性明显增加(P<0.05或P<0.01),而联合用药后明显高于单独用药组(P<0.05)。 5.体内TP增加肿瘤对化疗药物的敏感性: TP单独或联合CDDP和5-FU后同未用药组比较,均能明显降低肿瘤的生长,且联合用药组高于单独用药组,差异有统计学意义(P <0.05)。 结论体内外应用TP对肝癌细胞有明显的抑制作用,并能增强CDDP和5-FU化疗敏感性,有望成为一种新的肝癌治疗方案。……   
[关键词]:雷公藤甲素;肝癌;顺铂;5-FU;细胞凋亡;ROS;Caspase-3
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年