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TNF-α对脂肪细胞增殖分化和Toll样受体4表达及其信号通路的影响

欧红芹

  目的:近年来研究显示,肥胖是一种慢性低滴度的炎症,脂肪组织能够分泌众多炎性因子,本文观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人前脂肪细胞增殖和脂肪细胞分化的影响,对人原代脂肪细胞伴或不伴人单核/巨噬细胞系THP-1共培养体系中TLR4的表达及其信号通路、炎症因子脂联素和瘦素表达的影响。方法:(1)取外科手术病人腹部大网膜脂肪组织,用酶消化法获得人原代前脂 肪细胞,通过观察细胞的形态学变化,用油红O染色对脂肪细胞进行鉴定。 (2)使用不同浓度TNF-α(0 ng/ml、0.1 ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100 ng/ml)作用于前脂肪细胞12小时,24小时,48小时后CCK8法检测细胞增殖的情况。 (3)分化液诱导脂肪细胞分化至产生脂滴,在分化的第8天用不同浓度TNF-α干预分化的脂肪细胞24小时后,用油红O染色测定TNF-α对脂肪细胞分化的影响。 (4)通过Transwell小室建立人原代脂肪细胞培养和脂肪细胞-单核细胞的共培养体系,用流式细胞技术检测脂肪细胞、脂肪细胞和单核细胞共培养、用10ng/ml TNF-α干预共培养组24小时,丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路阻滞剂SP600125、PD98059、SB203580干预共培养体系一小时后再加TNF-α干预24小时后脂肪细胞表面TLR-4的表达情况,并收集细胞培养的上清,ELISA法检测脂联素,瘦素的表达情况。 结果:(1)TNF-α能促进前脂肪细胞的增殖,其中10ng/ml的TNF-α作用24小时后促增殖作用最强(P<0.05)。 (2)油红O染色结果表明TNF-α能够抑制前脂肪细胞的分化,减少脂肪的合成,以100ng/ml组最为显著(P均<0.05)。 (3)两种细胞共培养时脂肪细胞表面TLR-4的表达较单独培养时表达上升,TNF-α干预的共培养组表达进一步上升,而先加入SP600125,PD98059和SB203580再用TNF-α干预的共培养组,脂肪细胞TLR-4的表达都较只用TNF-α干预的共培养组减少(P<0.05)。 (4)ELISA结果显示共培养组较脂肪细胞单独培养组脂联素表达下调,TNF-α干预的共培养组表达最低,先加入MAPK信号通路阻滞剂SP600125、PD98059和SB203580再加入TNF-α的干预组较只用TNF-α干预的共培养组脂联素表达均上调,且结果有统计学差异(P均<0.05);瘦素表达在各组表达无明显变化。 结论:(1)TNF-α能够有效促进人原代前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的分化。 (2)TNF-α可以诱导脂肪细胞TLR-4的表达及其信号通路中JNK、ERK的激活;脂肪细胞和单核巨噬细胞之间可能有交叉对话,并影响下游炎症因子的表达。……   
[关键词]:肥胖;炎症;TNF-α;脂肪细胞;TLR4;MAPK
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年