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青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义

孙超

  青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达及意义 第一部分青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定 目的建立青少年成骨细胞(osteoblast,OB)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的方法,为后续分子生物学检测做准备。 方法试验对象为2008年03月至2009年04在我院行后路手术的女性AIS患者26例。根据测量的骨密度值,将AIS患者分为两组:A组15例,为骨量正常患者,年龄12~18岁,平均14.6岁;B组11例,为骨量减低患者,年龄12~18岁,平均14.8岁。所有受试者均需取右侧髂松质骨行植骨融合,在病人知情同意和不影响手术疗效的情况下取少许松质骨标本。胰蛋白酶预消化后植块法分离培养OB,原代培养并传至P2代行细胞记数,同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞通过碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达行OB的表型鉴定。 结果两组胰蛋白酶预消化后植块法分离所得的原代OB均呈贴壁生长。体外培养第5~6天可见少量贴壁细胞,培养第4周见植块周围细胞密集,已呈重叠生长,植块间细胞也接近融合,细胞形态趋向较均匀的短梭形。P2代细胞总数平均可达0.5×107个。两组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P>0.05),从P0~P2代平均约需45天。P2代细胞经碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达鉴定证实获得和培养的细胞为典型的OB。 结论1.植块法OB培养能获得大量原代成骨细胞的同时,较好地保持了其生物学特征,是一种较理想的人成骨细胞培养方法。2.两组AIS患者在体外分离、培养、扩增OB时所表现的生长及增殖特性一致。 第二部分成骨细胞中核心结合因子ɑ1和骨形态发生蛋白-2的表达与青少年特发性脊柱侧凸患者骨量降低的关系 目的从成骨细胞(osteoblast,OB)水平探讨核心结合因子ɑ1(Runx2)、骨形态发生蛋白-2 (bone morphogenetic proteins, BMP-2)与青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)患者骨量降低的关系。 方法试验对象为2008年03月至2009年04在我院行后路手术的女性AIS患者26例。根据测量的骨密度值,将AIS患者分为两组:A组15例,为骨量正常患者,年龄12~18岁,平均14.6岁;B组11例,为骨量减低患者,年龄12~18岁,平均14.8岁。所有AIS患者均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy x-ray absorptiometry,DEXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD),测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P2代使用RT-PCR和Western blotting检测两组中Runx2和BMP-2的mRNA及蛋白表达的情况。 结果B组腰椎(L2~L4)及股骨近端的BMD值明显低于A组。RT-PCR和Western blotting显示:1.两组病例BMP-2的核酸及蛋白的表达量均无显著统计学差异(P>0.05)。2. B组中Runx2的核酸及蛋白水平的表达量均较A组低( P<0.05)。 结论AIS骨量降低可能与OB细胞中BMP-2的表达强度无关。Runx2在OB水平核酸及蛋白表达强度的异常可能是导致AIS骨量降低的一个重要分子机制。……   
[关键词]:青少年;脊柱侧凸;成骨细胞;单层培养;青少年;脊柱侧凸;骨密度;成骨细胞;Runx2;BMP-2
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2009年