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青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核因子κB受体活化子配体和骨保护蛋白的表达

殷刚

  青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中核因子κB受体活化子配体和骨保护蛋白的表达 1.青少年成骨细胞的体外分离、培养、扩增及表型鉴定 目的建立青少年成骨细胞(osteoblast,OB)体外分离、培养、扩增及表型鉴定的 方法,为后续分子生物学检测做准备。方法所有研究对象分为2组:青少年特发性脊柱侧凸( adolescent idiopathic scoliosis ,AIS)组和正常对照组。其中AIS组包括患者20例。女15例,男5例;年龄11~19岁,平均年龄14.75岁;术前Cobb角40°~96°,平均59.65°。正常对照组8例,为非脊柱侧凸患者,女2例,男6例,年龄10~19岁,平均年龄15.25岁。所有受试者均需取右侧髂松质骨行植骨融合,在病人知情同意和不影响手术疗效的情况下取少许松质骨标本。胰蛋白酶预消化后植块法分离培养OB,原代培养并传至P2代行细胞记数,同时记录细胞样本各代的增值时间。取P2代细胞通过碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达行OB的表型鉴定。 结果两组胰蛋白酶预消化后植块法分离所得的原代OB均呈贴壁生长。体外培养第5~6天可见少量贴壁细胞,培养第4周见植块周围细胞密集,已呈重叠生长,植块间细胞也接近融合,细胞形态趋向较均匀的短梭形。P2代细胞总数平均可达0.5×107个。两组细胞各代平均增值时间无统计学差异(P>0.05),从P0~P2代平均约需45天。P2代细胞经碱性磷酸酶染色、钙节结染色及RT-PCR检测骨钙素表达鉴定证实获得和培养的细胞为典型的OB。 结论AIS患者与正常对照组在体外分离、培养、扩增OB时所表现的生长及增殖特性一致。 目的从成骨细胞(osteoblast,OB)水平探讨核因子κB受体活化子配体( receptor activator of NFκB ligand,RANKL)、骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)与青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis ,AIS)患者骨量降低的关系。 方法本实验分为两组:AIS组,20例(男5例,女15例),年龄11 ~19岁,平均14.75岁,Cobb角40°~96°,平均59.65°;同年龄对照组,8例(男6例,女2例),年龄10~19岁,平均15.25岁。AIS组及对照组均采用双能X线吸收测量仪(dual-energy x-ray absorptiometry,DEXA)测量骨密度(bone mineral density,BMD),测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P2代使用RT-PCR和Western blotting检测AIS组和正常对照组中RANKL和OPG的mRNA及蛋白表达的情况。 结果AIS组腰椎(L2~L4)及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组。RT-PCR和Western blotting显示:1. AIS组中RANKL的核酸及蛋白水平的表达量均较正常对照组高( P<0.01)。2. AIS组与正常对照组OPG的核酸及蛋白水平的表达量无明显统计学差异(P>0.05)。3. AIS组RANKL /OPG比值明显高于正常对照组(P<0.01)。 结论成骨细胞中RANKL及OPG在核酸及蛋白水平的表达异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。……   
[关键词]:青少年;脊柱侧凸;成骨细胞;单层培养;青少年;脊柱侧凸;骨密度;成骨细胞;RANKL;OPG
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2009年