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超声波联合曲拉通X-100 制备猪去细胞的主动脉支架的研究

张永生

  【目的】 探索超声波联合曲拉通X-100制备猪升主动脉去细胞支架的方法及效果。 【方法】 从体重相近的中华实验猪制备新鲜主动脉标本280份,随机分为6组:空白对照组、超声波(90KW)联合曲拉通X-100组、超声波(135KW)联合曲拉通X-100组、超声波(180KW)联合曲拉通X-100组、曲拉通X-100组、曲拉通X-100联合十二烷基硫酸钠组。空白对照组是新鲜主动脉标本未经任何去细胞处理,保存在PBS液中。超声波(90KW)联合曲拉通X-100组是标本先置于1% TritonX-100缓冲液中振荡1 h。然后置于超声波破碎仪中,功率设置为90KW,工作5分钟,振荡清洗1小时。超声波(135KW)联合曲拉通X-100组的超声波破功率设置为135KW,其余条件同组二。超声波(180KW)联合曲拉通X-100组的超声波破功率设置为180KW,其余条件同组二。曲拉通X-100组是标本置于1%TritonX-100缓冲液孵育振荡176h。曲拉通X-100联合十二烷基硫酸钠组是标本置于1% TritonX-100缓冲液中,孵育振荡48h。然后置于0.1%SDS缓冲液孵育振荡48h。通过组织学及电镜观察细胞动脉支架中内膜面的细胞成分是否完全脱落、胶原纤维等超微结构是否保持完整。通过免疫组织化学检测层粘连蛋白和纤维连接蛋白和空白对照组有无显著差异。通过热皱缩温度测定分析比较各组去细胞后支架的胶原是否发生异常交联。通过生物力学性能测定分析比较各组去细胞后支架的力学性能。 【结果】 空白对照组的HE染色可见正常完整的胶原纤维网状结构网状的结构和大量蓝紫色的内皮和间质细胞核。HE染色DAPI染色均发现超声波联合曲拉通X-100可以完全去除动脉细胞。扫描电镜下空白对照组动脉内膜表面的内皮细胞紧密排列,结构完整。超声波(135KW)联合曲拉通X-100组的动脉内膜面未见细胞或其碎片,内膜下的细胞外基质结构完整、清晰,无破坏,胶原纤维清晰可见。超声波(135KW)联合曲拉通组的免疫组化染色及捷达-801图像分析仪系统定量分析显示了Ln、Fn的保存和空白对照组无显著差异。超声波联合曲拉通去细胞组标本生物力学性能、热皱缩变形时的温度和新鲜动脉组的差异无统计学意义。超声波联合曲拉通组支架的组织形态、生物力学等保持良好,层粘连蛋白和纤维连接蛋白的保存明显优于传统的化学去细胞方法。 【结论】 超声波联合曲拉通X-100组去细胞效果优于传统化学去污剂,是理想的制备猪动脉去细胞支架的方法。……   
[关键词]:去细胞动脉支架;超声波;曲拉通X-100
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2009年