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多发性骨髓瘤分子细胞遗传学技术及细胞遗传学异常的研究

王晓炜

  第一部分骨髓涂片荧光原位杂交法检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常 目的: 建立骨髓涂片间期荧光原位杂交(I-FISH),为检测多发性骨髓瘤(MM)分子细胞遗传学提供新的方法。 方法: 以骨髓涂片为载体,通过一系列的处理、固定及消化后,用8号染色体着检测丝粒探针行I-FISH进行分子细胞遗传学的检测,正常对照为非血液系统恶性疾病患者的标本,并比较该方法与常规I-FISH结果的差异。并检测MM细胞系U266、RPMI-8226的8号染色体异常。 结果: 骨髓涂片I-FISH与常规I-FISH两种方法分析非恶性血液病标本的各个信号比例行配对t检验比较无统计学差异(P>0.05)。骨髓涂片I-FISH研究中,19例MM患者中有8例(42.1%)有8号染色体异常,其中单体(?8)5例(26.3%),三体(+8)3例(15.8%)。U266细胞系8号染色体数目正常,而RPMI-8226为+8。 结论: 骨髓涂片I-FISH具有操作简便、经济、准确的特点,可用于MM分子遗传学异常的研究。 第二部分 免疫表型结合间期原位杂交法检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常 目的: 建立骨髓涂片荧光免疫表型结合间期原位杂交(FICTION)技术,为检测多发性骨髓瘤(MM)患者分子细胞遗传学异常提供新方法。 方法: 以骨髓涂片为载体,通过标记FITC的抗CD138抗体筛选浆细胞(PCs ),比较荧光显微镜下筛选的PCs比例和MGG染色后光镜下形态学检测的PCs比例差异,同时采用8号染色体着丝粒探针行间期荧光原位杂交技术,检测PCs的8号染色体异常情况。正常对照选用5份非血液系统恶性疾病患者的骨髓涂片。 结果: 骨髓涂片上荧光抗体筛选的PCs比例与骨髓形态学PCs比例配对t检验相比无统计学差异(P>0.05),9例患者中有4例(44%)有8号染色体异常,其中8号染色体单体(?8)3例(33%),8号染色体三倍体(+8)1例(11%)。 结论: 骨髓涂片FICTION具有简便、特异、准确的特点,可用于MM分子遗传学异常的研究。 第三部分 胞浆轻链免疫荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤细胞遗传学异常 目的: 建立骨髓单个核细胞涂片胞浆轻链免疫荧光原位杂交技术(cIg-FISH),为检测多发性骨髓瘤(MM)患者的分子细胞遗传学提供新方法。方法:以骨髓单个核细胞涂片为载体,采用8号染色体着丝粒探针行间期荧光原位杂交技术,检测MM浆细胞(PCs)的8号染色体异常情况,并且通过联结7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(AMCA)的抗人κ或λ链抗体标记MM标本中PCs,然后通过联结AMCA的二抗增强荧光。 结果: 单个核细胞涂片上胞浆荧光抗体筛选的PCs有明显的蓝色荧光,18例患者中有7例(38.9%)有8号染色体异常,其中8号染色体单体(?8)5例(27.8%),8号染色体三倍体(+8)2例(11.1%)。 结论: 骨髓单个核细胞涂片cIg-FISH具有简便、特异、准确的特点,可用于MM分子遗传学异常的研究。 第四部分多发性骨髓瘤的1q21/CKS1B异常研究 目的: 探讨1q21/CKS1B基因扩增在多发性骨髓瘤(MM)中的意义。 方法: 应用CD138单克隆抗体免疫磁珠分选系统(MACS)分选MM患者骨髓中浆细胞(PCs),纯化的PCs行低渗固定后,采用1q21荧光标记探针,应用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)检测MM患者的1q21/CKS1B异常扩增情况。 结果: 38例MM患者中有1q21/CKS1B扩增的21例(55.3%),无1q21/CKS1B扩增的为17例(44.7%)。1q21/CKS1B扩增在初发患者和复发患者中分别为48%和69.2%,与骨髓浆细胞的增多(P=0.011)、Hb减低(P=0.020)相关联。初发患者和复发患者中有4个以上1q21拷贝扩增分别为16%和46.2%,在有1q21的扩增中,它们比例分别为33.3%和66.7%。细胞系RPMI-8226、U266均为阳性。 结论: 1q21/CKS1B扩增与MM疾病进展相关,以4个1q21拷贝以上扩增为主的骨髓瘤细胞可能有着更高的恶性度,但能否作为独立的预后因素,有待于扩大样本量及完善资料后进一步研究分析。……