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免疫磁珠的制备及其初步应用

喻伟

   免疫磁珠(Immunomagnetic beads,IMB),是由载体微球和免疫配基结合而成的一种纳米级材料。免疫磁珠分离技术是以高均一性的磁性微球为固相支持物,将免疫配基(如抗体,抗原等)通过功能基团结合到磁性载体上形成免疫磁性微球,利用特异性的免疫学反应,在磁力作用下,发生力学移动,从混合溶液中分离出特异性的靶物质。具有分离速度快,效率高,可重复性好,操作简单,不需要昂贵的仪器设备等优点。 本实验采用化学共沉淀的方法合成了纳米级Fe3O4磁性微粒,具有颗粒均一程度高,悬浮稳定性好,超顺磁性等特点,经固体物含量的测定及其粒径的测定,磁珠的浓度约为7.9mg/mL,粒径约为30~100nm左右,对其悬浮液加入烷基化试剂和醛基化试剂进行表面修饰,提高了磁性微粒的性能。 小肠结肠炎耶尔森氏菌是急性胃肠炎型食物中毒的病原菌,属于重要的食源性致病菌,很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。本研究对小肠结肠炎耶尔森氏菌复苏及扩大培养后进行抗原的制备,通过平板计数,测定其浓度约为2.3×1010CFU/mL,以此菌液作为免疫原制备兔抗血清,采用饱和硫酸铵法粗提、葡聚糖凝胶G-200过柱纯化IgG,用提纯的IgG包被免疫磁珠,确定了IgG包被磁珠的最佳偶联条件(包括最佳反应介质,最佳温度,最佳时间)。建立了利用免疫磁珠技术富集小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法,确定了多克隆抗体包被磁珠最佳浓度,免疫磁珠最佳工作浓度,免疫磁珠与菌液最佳作用时间,免疫磁珠技术的敏感性等,其灵敏度约为70CFU/mL。抗体IgG包被磁珠的最佳浓度为100μg/mL。通过最佳反应条件的摸索,降低了免疫磁珠在富集小肠结肠炎耶尔森氏菌过程中的非特异性反应。结果表明,利用免疫磁珠技术的富集细菌过程具有快速、简便、高效等特点。本实验的研究结果为小肠结肠炎耶尔森氏菌快速检验方法的研究奠定了基础。……   
[关键词]:免疫磁珠;小肠结肠炎耶尔森氏菌;富集
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年