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猪长效精液稀释剂的研制及临床应用研究

荆汝顶

   猪精液的常温保存技术是实行人工授精的重要环节,对降低生产成本,提高经济效益有非常重要的意义。然而,我国常温保存精液的有效时间一般仅为2-3d,大多数猪场采用自配的稀释液,其保存时间短。目前国内使用的猪精液常温保存稀释液大多从国外购买,进口商品价格比较贵,增加了养殖成本,所以开发出保存时间长、保存效果良好、经济实用的稀释剂对人工授精技术和降低人工授精成本具有重要的意义。本课题对猪精液常温保存稀释液的配方物质、产品使用和临床同类产品的验证试验进行了深入研究。试验从配方用物质着手,比较了几种添加物对精液保存效果的影响,利用正交试验设计得出精液稀释剂的基础配方,并对其稳定性进行考察,制定出质量标准,与市场上同类产品进行精液保存试验和临床繁殖试验验证。 课题研究中配方的筛选采用6因素4水平的正交实验设计,组方中精液与稀释剂的比例设定为1:2,通过精子活力的测定,确定各成分的比例;配方筛选后,设定不同的精液与稀释液配比,分别在0h、24h、48h、72h、96h、120h测定精子的活力,得出最佳稀释比;利用稳定性加速试验,在高、中、低温度(4℃,40℃,60℃)和湿度(60%,45%,28%)条件下考察精液稀释剂的稳定性;精液稀释剂中加入不同的抗微生物药物(青霉素+链霉素,恩诺沙星,硫酸粘杆菌素,恩诺沙星+二性霉素B),设定精液和精液稀释剂的稀释比分别为1:1、1:2、1:4、1:8,在17℃条件下分别在0h、24h、48h、72h、96h、120h检查其保存活力,选择合适的抗生素;在相同条件下和进口BTS、ZorPVa精液稀释剂进行精液稀释保存试验,以精子活力和保存时间为指标,比较其保存效果;设立与国外同类产品的对照试验,测定所试精液稀释剂的人工授精的受胎率(%)与窝产活仔数。 通过正交试验设计筛选出精液稀释剂的配方中葡萄糖、柠檬酸钠、碳酸氢钠、EDTA、氯化钾的比例为0.8:0.13:0.027:0.027:0.016;通过不同的稀释比进行稀释保存试验得出,在相同时间内精液与精液稀释液比例为1:1-2时精子活力较强;分别设定高、中、低3个温度和湿度对稀释粉的稳定性进行研究,研究结果表明:精液稀释剂适合低温阴凉处保存,最好是在4℃冰箱内,湿度在28%以下;通过不同抗生素的添加试验,得出稀释剂中加入恩诺沙星和二性霉素B效价较高,并且精子活力维持时间较长;研制精液稀释剂保存时间在5d以上有效活力在0.7级以上,比BTS保存效果好,和ZorPVa保存效果相当;以进口ZorPVa精液稀释粉为对照品,进行临床繁殖验证试验,试验结果表明:试验品和对照品的受胎率均为93.3%,差异无显著性意义(P>0.05);试验品组的窝产活仔数为9.64头,对照品组窝产活仔数为9.71头,差异无显著性意义(P>0.05)。 通过本课题研究,研制出能保存5d以上有效活力在0.7级以上的精液稀释液,达到研究的指标。在下一步的工作中需要与企业联合建立中试基地,进行小批量生产,在临床实践中进行推广应用,并进行不断的总结、改进。……   
[关键词]:人工授精;猪精液;精液稀释剂;常温保存;繁殖试验
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年