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生长抑素DNA免疫对小鼠体组织的影响及表达产物的分布规律

刘欣

   本研究应用免疫组织化学(streptavidin-biotin-peroxidase-complex, SABC)、HE染色等技术,在无抗性筛选生长抑素DNA疫苗(pGS/2SS-M4GFP-asd)肌肉注射7周龄的雄性昆明小鼠后,检测DNA疫苗表达产物在小鼠各组织分布的细胞类型和消长规律,并且对其免疫效果进行评价。旨在探讨疫苗的免疫机制和安全性,为开发高效、安全的促进动物生长的DNA疫苗,并加快其临床应用奠定基础。 1生长抑素DNA免疫的表达产物在小鼠体组织中的分布 将生长抑素DNA疫苗肌肉注射免疫7周龄的雄性昆明小鼠,分别于免疫后24h、48h、5d、7d、9d、11d采集小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉组织,经固定、浸蜡、包埋、组织切片后,免疫组织化学染色,旨在探讨生长抑素DNA疫苗的表达产物在小鼠各组织细胞中的分布。结果表明:DNA疫苗表达产物主要分布于肌肉组织的中性粒细胞、巨噬细胞、成纤维细胞,脾脏组织中的巨噬细胞,肝脏组织中的肝细胞,而心脏、肺脏、肾脏各组织细胞中尚未检测到SS阳性信号。 2生长抑素DNA免疫的表达产物在小鼠体组织中的消长规律 分析上述不同时期的切片结果,探讨生长抑素DNA疫苗的表达产物在小鼠各组织及各种细胞中的消长规律。结果表明:肌肉组织中成纤维细胞在免疫24h后,能摄取减毒沙门氏菌并在其胞浆中出现了疫苗表达产物,且在免疫48 h达到高峰,而在免疫第5d后成纤维细胞中检测不到SS阳性信号。从免疫后7d至11d,可在巨噬细胞中检测到疫苗表达产物的分布。 免疫48 h后,显微显微镜下可观察到疫苗表达产物分布于脾脏组织的巨噬细胞的胞浆中,一直持续到免疫后11 d。与此类似的是,在免疫48 h后可观察到疫苗表达产物在肝细胞的胞浆中的分布,但是仅持续到免疫后第7 d。 3生长抑素DNA免疫对小鼠体组织的影响 为了分析生长抑素DNA疫苗中所含有的猪霍乱减毒沙门氏活菌对小鼠的生长发育是否有毒害作用,本试验对小鼠进行了全程健康状况观察记录,并用HE染色方法分析了各种组织切片在不同时期的变化情况,结果在整个实验过程中未观察到小鼠的死亡,猪霍乱减毒沙门氏活菌对肝脏造成一定的病理损伤,但是小鼠在免疫第7d后肝脏能对损伤的组织进行自我修复,并能维持肝脏正常的机能,除此之外,未检测到其他组织有所病理性损伤。……   
[关键词]:免疫组织化学;HE染色;沙门氏菌
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年