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金黄色葡萄球菌肠毒素B作为免疫佐剂的研究

周晓芬

   动物疫病的频发给养殖业发展造成了困扰,尤其是病毒性疫病缺少有效的治疗,积极的免疫预防是不可或缺的。目前畜禽用的疫苗有各种类型,包括很多新型疫苗,如亚单位疫苗,重组疫苗和合成多肽疫苗等,但此类疫苗免疫原性较弱,单独免疫难以达到有效的免疫效果,开发活性高而副作用低的新型免疫佐剂的研究日益迫切。 佐剂是指与抗原同时或预先应用,能增强机体针对抗原的免疫应答能力,提高免疫效果的物质;目前研究的佐剂有上百种,其功能主要是增强机体应答、减少抗原接种剂量和接种次数、促进疫苗在免疫应答能力弱的群体中的免疫效果、加快免疫应答的速度和延长持续时间等,具备这种免疫功能的物质都有成为免疫佐剂的潜力。 金黄色葡萄球菌分泌的肠毒素B(SEB)是一种具有超抗原性质的外毒素,具有MHC结合的非限制性;可激活外周血T细胞,调节NK细胞以及刺激淋巴细胞产生TFN-α和活化Thl细胞等功效。能够刺激T细胞活性,提高机体免疫水平,尤其是细胞免疫水平。SEB非特异性地激活免疫细胞,引起众多细胞因子产生的能力使其具备成为免疫佐剂的潜力。本课题的研究内容主要包括: 根据SEB DNA序列设计合成了一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌S6株基因组为模板,采用PCR方法扩增了SEB基因并克隆到pMD18-T载体,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,结果表明该基因全长720 bp,与已报道的PM36株序列同源性达100%。构建了原核表达质粒pKG-SEB和pET-28a-SEB,并分别在大肠杆菌中进行了高效表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,结果分别出现了与预期分子量大小一致的54 KD和28 KD的蛋白条带,Western-blotting分析表明表达的融合蛋白产物均具有良好的生物学活性,为今后进一步的研究奠定了坚实基础。 将含有禽流感病毒H5亚型HA1的原核表达载体pKG-HA1在大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物上清及包涵体进行SDS-PAGE电泳分析,出现了与预期融合蛋白GST-HA1分子量大小一致的蛋白条带约60 KD,且目的蛋白多以包涵体形式存在。 本实验采用几个浓度的重组SEB和标准SEB分别与AIV H9/NDV二联灭活苗免疫两周龄艾维因肉鸡,通过对抗体滴度及淋巴细胞活性的测定反映SEB的免疫增强效果。实验数据显示重组SEB按5μg/只的剂量免疫肉鸡时有较好的免疫增强效果;在免疫前期SEB免疫组较疫苗对照组抗体效价增长快,7d和14 d时,重组SEB中剂量组抗体效价比疫苗对照组高约2.0个滴度,到28 d时,仍比疫苗对照组抗体效价高约1.5个滴度,统计分析表明SEB免疫组的效价显著高于疫苗对照组(P<0.05),重组SEB中剂量组与其他SEB免疫组的效价均有显著差异(P<0.05);淋巴细胞活性在免疫后15d达最高,重组SEB中剂量组比疫苗对照组高约2.5倍,统计分析差异显著(P<0.05),到25 d时差异减小但仍显著。 将重组SEB按5μg/只的剂量分别与AIV H5灭活苗、重组蛋白GST-HA1免疫雏鸡,同时设各对照组,实验数据显示重组SEB对灭活苗及重组亚单位苗的免疫都起到了增强效果,其中疫苗和SEB免疫组的抗体效价显著高于疫苗免疫组和疫苗空载免疫组(P<0.05),HA1和SEB免疫组的抗体效价也显著高于HA1免疫组(P<0.05)。 SEB作为一种超抗原具有超强的免疫激活能力,本实验通过三次动物实验优化了SEB较好发挥免疫效果时的免疫剂量,实验表明适当剂量的SEB可增强机体对疫苗的免疫应答,无论是体液免疫还是细胞免疫。……   
[关键词]:SEB;佐剂;细胞免疫;体液免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年