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苎麻叶黄酮的提取、分离纯化、结构及抗氧化活性的研究

贺波

   苎麻(Boehmeria nivea)为荨麻科苎麻属多年生草本植物,是我国重要的出口创汇经济作物,而苎麻叶作为工业废弃品丢弃,资源浪费严重并污染环境。苎麻叶具有一定药用价值,本文以苎麻叶为原料,对其中的活性成分黄酮类化合物进行提取、分离纯化,结构及抗氧化活性进行研究。 1苎麻叶黄酮类化合物提取工艺的优化 采用两种方法对“华苎4号”苎麻叶中黄酮类化合物进行提取工艺研究。方法一为乙醇加热回流法,通过对乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度进行正交实验优化,得出最佳的提取工艺条件是:料液比1:60,乙醇浓度70%,提取时间1.5h,提取温度80℃,提取一次。在此工艺条件下苎麻叶(华苎4号)中黄酮类化合物得率为3.76%。方法二采用超声辅助提取法,通过单因素及正交实验,得出最佳的提取工艺条件是:液固比30:1,乙醇浓度70%,超声功率60 W,超声时间30 min,超声温度60℃,提取一次。在此工艺条件下苎麻叶中黄酮类化合物得率为4.94%。 采用乙醇加热回流法,通过对8个品种苎麻叶黄酮类化合物得率比较,得出“芦竹青”黄酮得率最高,为6.62%;“华苎5号”黄酮得率最低,为2.74%。 通过两种方法比较,超声辅助提取比乙醇提取苎麻叶黄酮类化合物的得率高1.18%,且所用溶剂和时间大大缩短。 2苎麻叶黄酮类化合物的分离纯化 探讨了四种大孔吸附树脂(AB-8、D101、S-8和聚酰胺)对苎麻叶黄酮吸附的影响。通过静态吸附和解吸实验得出,AB-8树脂的综合性能较佳,有较高的吸附率和解吸率。通过AB-8大孔吸附树脂动态吸附-解析实验,AB-8树脂对苎麻叶中黄酮类化合物的动态洗脱的最佳条件为:溶液pH值为4,上样液浓度为1.508 mg/mL,2 BV的70%乙醇洗脱,洗脱速率为1 mL/min。收集50%乙醇洗脱液,减压浓缩后冷冻干燥,得到苎麻叶黄酮初步纯化物(简称黄酮粗品),黄酮类化合物含量达到29.85%,与上柱前黄酮粗提物比较,提高了5.3倍。 葡聚糖凝胶LH-20能有效的分离苎麻叶中黄酮类化合物。将过AB-8树脂的黄酮初步纯化物经乙酸乙酯萃取,萃取液浓缩后过LH-20葡聚糖凝胶柱,分别以30%、50%、70%和90%甲醇洗脱。收集50%甲醇洗脱液和90%甲醇洗脱液,分别得到两种组分RF1和RF2。通过高效液相色谱分析,纯度均达到90%以上。 3苎麻叶黄酮类化合物的结构初探 通过显色反应和UV,可初步推断纯化后的黄酮样品为黄酮醇类化合物及异黄酮类化合物。通过IR分析,其均具有黄酮类特征官能团。通过HPLC分析六种流动相,得到最佳的流动相为水(pH=3)-甲醇(0.45:0.55)。通过HPLC和GC分析,可初步断定RF1物质为芦丁,组分2(RF2)需要进一步做液相-质谱分析。 4苎麻叶黄酮类化合物的抗氧化活性 研究了化学模拟体系下苎麻叶黄酮粗品(过AB-8树脂)和纯化样品RF1的抗氧化能力。通过实验得知,IC50Vc<IC50RF1<IC50黄酮粗品,说明总抗氧化能力Vc>RF1>黄酮粗品。总抗氧化能力与浓度呈现良好的量效关系,随着浓度的增大,抗氧化能力逐渐增强,但到一定浓度,抗氧化能力增幅不大,逐渐趋于平衡。实验还表明RF1纯化物的抗氧化能力高于黄酮粗品。结果显示,苎麻叶中黄酮对超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢等均有一定的抗氧化能力。……   
[关键词]:芒麻叶;黄酮;提取;分离纯化;结构鉴定;抗氧化活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年
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