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流感病毒H1N1在MDCK细胞的培养及纯化条件的优化

冯婷;涂文伟;黄娟;李晋蓉;殷仲伟;范营营;李虹

  目的优化流感病毒HlNl在MDCK细胞上的培养条件,高效扩增流感病毒。方法对MDCK细胞培养流感病毒时添加的TPCK-Trypsin的浓度和培养基的种类进行了筛选;比较了不同细胞代次的MDCK对流感病毒的易感性;按MOI值0.001、0.01、0.1于MDCK细胞上接种H1N1,CPE>75%收获病毒上清,并按MOI值0.001接种H1N1后连续培养5天,分别于1、2、3、4、5天收获病毒上清,HA试验检测上清滴度,上清浓缩纯化后行TCID50检测,分别选取最佳的接种MOI值和收毒时间;最后对浓缩纯化病毒的红细胞吸附方法进行检验。结果通过对比,TPCK-Trypsin的最佳作用浓度是0.25ug/ml,MEM为培养病毒的最佳培养介质;代次低的MDCK对流感病毒的易感性明显强于代次高的MDCK细胞;于MDCK细胞按MOI值0.001接种H1N1,且第3天收获的上清病毒滴度最高;红细胞吸附法能高效浓缩纯化流感病毒。结论优化了在MDCK细胞上培养及纯化流感病毒的方法 。……   
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