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抗HCCR单克隆抗体的制备及其在肝癌检测中的初步应用

郝波;张国新;林艳;杨杨;王宏娣

  目的制备抗人宫颈癌癌基因(HCCR)单克隆抗体及其在肝癌检测中的初步应用。方法将 HC- CR 中编码 COOH 端167-360氨基酸的 cDNA 克隆入原核表达载体 pMBP-C 中,转化至大肠杆菌 Top10F’中,以 IPTG 诱导重组目的蛋白的表达,经 Ni-NTA 螯合层析纯化目的蛋白。将纯化后的原核表达蛋白注入 BALB/c 小鼠腹腔诱导其产生免疫应答,采用杂交瘤技术制备抗人 HCCR 单克隆抗体,并应用 ELISA 及 Western blot 等方法鉴定抗体的敏感性和特异性;所得到的抗人 HCCR 单克隆抗体用 West- ern blot 方法对肝癌及癌旁组织中 HCCR 蛋白表达进行分析,并进一步应用免疫荧光细胞内染色方法检测……