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丹酚酸B盐对肝细胞凋亡的影响与部分作用机制

闫秀川;陈倩;沈丽;陶艳艳;刘成海

  背景与目的:肝细胞凋亡是肝脏疾病早期损伤的重要病理改变,也是肝纤维化与肝硬化等晚期病变形成的基本条件。研究表明,丹参及其水溶性成分——丹酚酸B盐有较好的抗肝脏炎症及抗肝纤维化作用。然而,丹酚酸B盐基于影响肝细胞功能而抗肝脏炎症损伤及其纤维化的的作用机制尚不清楚。药物高内涵筛选分析技术(HCS)是近年来出现在药物筛选方面的一门新技术,但用于中药毒性评价及药理方面的研究较少。因此本文采用HCS等技术,探讨丹酚酸B盐对肝细胞凋亡的作用及其主要作用机制。方法:30只雄性昆明小鼠,随机分为正常组(10只),模型组(10只),药物组(10只)。药物组小鼠给予丹酚酸B盐10mg/kg剂量灌胃(相当于65kg正常成人体重的10倍量),每日2次,连续3日预防用药,第4日灌胃后1小时开始造模。LPS 10μg/Kg、GalN 900 mg/Kg小鼠体重的剂量,腹腔注射模型组与药物组小鼠,正常组腹腔注射等量生理盐水。6h后处死小鼠,试剂盒法检测血清ALT、AST活性,HE染色观察肝组织炎症病理,TUNEL染色检测肝组织肝细胞凋亡;人肝癌SMMC7721细胞株,分为正常组、模型组、药物组。药物组给予1μmol/ml SA-B预处理1h后,以放线菌素D(Act D)100 ng/ml联合肿瘤坏死因子α(TNF-α)20 ng/ml作用6h诱导细胞凋亡,流式细胞术和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,高内涵筛选分析技术检测细胞线粒体膜电位变化,免疫印迹法分析TNFR1受体表达,Bcl-2/Bax表达比例,以及caspase-3蛋白表达变化。结果:体内实验表明,丹酚酸B盐预防用药,可明显改善模型组肝组织炎症,降低升高的血清ALT、AST水平,减轻肝细胞凋亡的发生(TUNEL染色)。体外实验表明,丹酚酸B盐预防用药,可明显保护模型组细胞降低的线粒体膜电位,减轻流式细胞术检测的细胞凋亡和DNA片段化,能显著降低TNFRI受体表达,纠正Bcl-2/Bax表达比例失衡,降低caspase-3蛋白表达。结论:丹酚酸B盐可明显抑制LPS/GalN诱导的急性肝损伤模型肝细胞凋亡和Act D/TNFa诱导的SMMC7721细胞凋亡:作用机制与下调TNFR1受体表达:保护线粒体膜电位,纠正Bcl-2/Bax比例失衡,降低caspase-3蛋白表达有关。……