目的:研究传统中药异喹啉类生物碱黄连素体外降糖的分子机制。方法:通过MTT法检测黄连素给药的合理浓度。用流式细胞仪FITC间接标记法检测黄连素作用人肝癌细胞系HepG2细胞后细胞膜上的胰岛素受体蛋白表达量。用逆转录定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛素受体mRNA的半衰期及黄连素作用后胰岛素受体mRNA的转录量变化。结果:给药48小时后,MTT检测黄连素对HepG2细胞的IC_(50)为176.65 ug/ml。不同浓度的黄连素作用HepG2细胞后,细胞膜上的胰岛素受体蛋白量逐渐增加,2.5 ug/ml,5 ug/ml,7.5 ug/ml,10 ug/ml黄连素分别使HepG2细胞膜上的胰岛素受体蛋白量增加2.3,2.6,3.2,3.5倍。qRT-PCR检测胰岛素受体mRAN半衰期结果表明黄连素基本不改变胰岛素受体mRAN的半衰期,对照组mRNA T_(1/2)为4.4小时,黄连素给药组T_(1/2)为4.7小时。不同浓度的黄连素使胰岛素受体mRNA转录量逐渐增加,2.5 ug/ml,5 ug/ml,7.5 ug/ml,10 ug/m,15 ug/ml黄连素使HepG2胰岛素受体mRNA转录量分别增加1.4,1.6,1.8,1.9,2.3倍。10 ug/ml黄连素不同给药时间使受体mRNA转录量逐渐增加,2h,4h,8h,12h,16h分别使受体mRNA增加1.1,1.3,1.6,1.9,2.4倍。结论:首次发现黄连素体外降糖机制主要通过增加胰岛素受体mRNA转录量进而增加胰岛素受体蛋白表达量而实现降糖,改善胰岛素的敏感性。……
