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小花棘豆内生真菌的培养、鉴定及分子系统学研究

霍红雁;卢萍;牛艳芳;吕桂芬;金凤;王金妞;李松

  小花棘豆是棘豆属多年生草本植物,许多植株含生物碱-苦马豆素,家畜采食小花棘豆后苦马豆素抑制细胞内甘露糖酶活性,引起中毒。国外对其他含苦马豆素的2种棘豆的研究发现,植物毒性与其内生真菌有关。本研究用小花棘豆单株植物茎、叶切段做外植体,体外培养内生真菌,研究菌落和分生孢子的微生物学特征,对培养的内生真菌菌丝体进行DNA提取和5.8SrDNA/ITS扩增,分析比对所有序列,结合真菌微生物形态特征,确定真菌类群。结果表明:采自四个种群的11株小花棘豆在体外培养出了内生真菌。真菌菌落呈白色,菌体分泌黑褐色物质,使白色菌落变灰直至灰黑色。少数真菌长出分生孢子,分生孢子近圆柱形,有宽厚且颜色较深的横隔膜,隔膜数为1~5个。菌落与分生孢子形态特征与真菌子囊门、腔菌纲、格孢腔菌目、格孢腔菌科的埃里砖隔孢属(Embellisia)特征一致。用真菌特异引物扩增出517bp的5.8SrDNA/ITS序列,所有序列中ITSl及5.8SrDNA区高度保守,序列完全一致,与Embellisia sp.L12菌株的序列有一个碱基变异,位于5.8SrDNA区第227位,ITS2区有2个变异位点,位于第511和517位。用MEGA4.0以N-J法构建5.8SrDNA/ITS系统发育树显示,五株小花棘豆内生真菌先聚为一个小分支,后与其他六株内生真菌和Embellisia sp.L12聚到一起,认为将小花棘豆内生真菌归入Embellisia较为合理。……