手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

应用siRNA抑制β~(654)地中海贫血过剩α珠蛋白和异常剪接β珠蛋白的表达

谢书阳;黄淑帧;张敬之;曾凡一;任兆瑞;曾溢滔

  β654地中海贫血是中国人最常见的β地贫之一,是由于β珠蛋白基因第二内含子654位C→T 点突变导致的剪接缺陷,产生一种异常剪接的mRNA,可致α/β珠蛋白链合成的不平衡,使红细胞寿命缩短,骨髓造血无效。由于β-珠蛋白合成速率降低,造成β-珠蛋白肽链缺乏,而使α珠蛋白肽链相对增多,多余α链沉积可以使细胞膜受到损伤。为了探讨siRNA能否有效抑制过多α珠蛋白肽链和β654异常剪接的mRNA的危害,我们设计和构建了特异于人α珠蛋白mRNA或异常剪接β珠蛋白 mRNA的siRNA干扰载体(,分别转染K562和HeLaβ654细胞,应用RT-PCR、定量PCR和ELISA 分析上述干扰对抑制α珠蛋白mRNA和异常剪接β珠蛋白mRNA表达的抑制作用。结果显示,本文构建的特异性siRNA载体能有效地抑制α珠蛋白mRNA的表达,α/γ-珠蛋白mRNA的比值从对照组的1.03±0.04下降到siRNA实验组的0.41±0.03(图1);反映细胞内α珠蛋白含量的胎儿型血红蛋白 (HbF,α2γ2)水平从对照组的214.1±6.1 ng/mL减少为siRNA实验组的150.1±7.8 ng/mL(表1); 特异于异常剪接β珠蛋白mRNA的siRNA载体能使HeLa β 654细胞中异常剪接β珠蛋白mRNA的含量降低至60%以上(图2,表2)。本研究为通过siRNA降低过剩α珠蛋白或抑制异常剪接β珠蛋白 mRNA的途径来治疗β地中海贫血提供了科学基础。……   
[关键词]:β珠蛋白;地中海贫血;siRNA
[文献类型]:会议论文
[文献出处]: 《第六次全国医学遗传学学术会议文摘汇编2005年