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时间分辨荧光免疫分析方法及其应用

田振;郭周义;贾雅丽

  标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度灵敏性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,具有极其良好的微量分析效果,现在己广泛应用于疾病诊断、疗效观察和医学科学研究。发展到目前,标记免疫分析法已包括放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。其中,时间分辨荧光分析法(TRFIA)是近十年发展起来的一测微量分析方法,是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10。9『nol/孔,较放射免疫分析(RIA)高出3个数量级。并且由于其具有标记物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好等优点,成为继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新里程碑,是目前配基结合分析中最有发展前途的一项生化超微量检测手段。时间分辨荧光免疫分析法(Time—Resolved F1uorescence Immunoassay,简称TRFIA)是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物(代替荧光物质、同位素或酶),标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞,待反应体系(如:抗原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)发生后,用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度,根据荧光强度和相对荧光强度比值。判断反应体系中分析物的浓度.达到定量分析的目的。TRFIA之所以能够继放免、酶标、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法,主要取决于它所用标记物的独一无二的物理及化学性质。这些稀土离子的螯合物经激发光激发后,能产生特征性的荧光,被激发的荧光有以下特点: (1)荧光衰变半衰期长(约1ms),为传统荧光的2—3倍: (2)激发光与发射光的Stokes位移大,可达几百纳米: (3)激发光波长范围宽,而发射光波长范围窄: (4)荧光强度高。本文谨就TRFIA技术原理、检测方法、仪器组成及其临床应用作简要介绍。……