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稻瘟菌胞外蛋白MoGAS1/MoGAS2的重组表达、纯化及晶体生长

席玉轩;王超;李国瑞;彭友良;刘俊峰

  由稻瘟菌引起的稻瘟病是一种世界性的水稻病害,严重影响着我国水稻的生产和粮食安全,如何防治稻瘟病,减少稻瘟病对水稻产量和质量的损害,提高水稻产量已成为全世界共同追求的目标。多种类农药的发明和使用为此提供了可能,而针对药物靶标进行合理化分子设计成为农药研发的重要手段。已有的研究表明稻瘟菌中MoGAS1和MoGAS2参与了蛋白激酶PMK1途径,在调控附着胞渗透能力和病原菌致病力中扮演着重要的角色,缺失编码这些蛋白的基因会导致附着胞渗透能力下降和病原菌致病力减弱,是潜在的药物设计靶点。获得MoGAS1和MoGAS2稳定均一的适合晶体生长的蛋白,解析其晶体结构,将为深入阐释其生物学功能和绿色农药设计提供重要的结构基础。本研究利用大肠杆菌原核表达系统,首先将MoGAS1和MoGAS2全长基因分别构建到相应的表达载体中,摸索适宜的表达体系进行蛋白表达纯化,发现全长的重组蛋白在不同载体中多数不可溶或不表达,只有MoGAS2在pETMBP-XE载体中获得稳定表达且均一的蛋白。通过晶体条件筛选在15%PEG3350为主沉淀剂的条件下获得晶体,晶体衍射分辨率为9A,正在尝试重复和优化晶体生长条件以获得更高分辨率的数据。除此之外,作者拟通过MoGAS1和MoGAS2二级结构和结构域的预测结果,综合考虑进行相应的截短,将不同截短体构建到相应表达载体中,筛选能稳定表达可溶且均一的蛋白样品,摸索合适的晶体生长条件,为解析这两个胞外蛋白的结构以及基于靶标的合理化绿色农药设计奠定坚实的基础。……   
[关键词]:稻瘟菌;MoGAS1/MoGAS2;蛋白纯化;晶体生长
[文献类型]:会议论文
[文献出处]: 《中国植物病理学会2017年学术年会论文集2017年