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双链RNA技术在植物病毒病监测中的应用

张俊;胡荣;李政;方守国;郭灵芳;李凡;章松柏

  正常的植物体内很难检测到双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的存在,但是植物遭受病原生物入侵后,往往产生大量的dsRNA,有些是植物应对病原物入侵而产生的小分子dsRNA,有些是RNA病毒入侵寄主而产生的复制中间体(replicative intermediate,RI)或病毒本身的基因组核酸就是dsRNA。鉴于90%的植物病毒病是RNA病毒引起的情况,探讨了dsRNA技术(dsRNA提取和克隆技术)在植物病毒病监测中的应用。具体应用如下:①dsRNA病毒病的监测,可选择双链RNA快速小量提取法,它能够从0.5~0.8 g的植物组织中快速提取dsRNA,借助dsRNA病毒特异的基因组图谱完成对样品的鉴定,在水稻病毒病的监测中得到了应用;②单链RNA病毒病的监测,可选择双链RNA快速大量提取法,即富集复制中间体的方法,从5~10g植物组织中富集病毒的dsRNA,然后通过克隆和序列分析完成鉴定,该方法在蔬菜和花卉病毒病中得到了应用;③新病毒的挖掘,借助dsRNA技术,发现了6种新的病毒,其中3种病毒的基因组已登录Genbank,即Brassica compestris chrysovirus 1(KP782029、KP78203、KP782031)、Panax notoginseng virus A(KT388111)、Erysiphe cichoracearum endornavirus(KT388110)。因此,双链RNA技术可以作为植物病毒病监测的一种重要手段。……